[发明专利]一步式胚胎培养液及其制备方法

权利要求书

1.一步式胚胎培养液，其特征在于，由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、N-乙酰基-L-半胱氨酸和基本培养液组成，所述基本培养液由氯化钠、氯化钾、硫酸镁、葡萄糖、庆大霉素、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、D-山梨醇、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、必需氨基酸、非必需氨基酸和人血清白蛋白组成；

各组分浓度依次为：氯化钠99.93mmol/L，氯化钾5.53mmol/L，硫酸镁1mmol/L，葡萄糖1mmol/L，乙二胺四乙酸0.01mmol/L，丙酮酸钠10.51mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺27.49mmol/L，牛磺酸0.48mmol/L，D-山梨醇0.23mmol/L，氯化钙1.8mmol/L，磷酸二氢钠0.15mmol/L，磷酸二氢钾0.15mmol/L，碳酸氢钠0.64mmol/L，(±)-a-硫辛酸0.078mmol/L，乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱0.078mmol/L，N-乙酰基-L-半胱氨酸0.782mmol/L，必需氨基酸0.7mmol/L-2.3mmol/L，非必需氨基酸0.5mmol/L-1.5mmol/L；

或者，各组分浓度依次为：氯化钠100.23mmol/L，氯化钾5.62mmol/L，硫酸镁1mmol/L，葡萄糖1mmol/L，乙二胺四乙酸0.011mmol/L，丙酮酸钠10.87mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺28.15mmol/L，牛磺酸0.46mmol/L，D-山梨醇0.24mmol/L，氯化钙1.83mmol/L，磷酸二氢钠0.145mmol/L，磷酸二氢钾0.145mmol/L，碳酸氢钠0.68mmol/L，(±)-a-硫辛酸0.082mmol/L，乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱0.075mmol/L，N-乙酰基-L-半胱氨酸0.705mmol/L，必需氨基酸0.7mmol/L-2.3mmol/L，非必需氨基酸0.5mmol/L-1.5mmol/L；

或者，各组分浓度依次为：氯化钠89.937mmol/L，氯化钾5.75mmol/L，硫酸镁1mmol/L，葡萄糖1mmol/L，乙二胺四乙酸0.01mmol/L，丙酮酸钠10.86mmol/L，丙氨酰谷氨酰胺28.66mmol/L，牛磺酸0.493mmol/L，D-山梨醇0.24mmol/L，氯化钙1.86mmol/L，磷酸二氢钠0.16mmol/L，磷酸二氢钾0.16mmol/L，碳酸氢钠0.68mmol/L，

(±)-a-硫辛酸0.082mmol/L，乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱0.068mmol/L，N-乙酰基-L-半胱氨酸0.851mmol/L，必需氨基酸0.7mmol/L-2.3mmol/L，非必需氨基酸0.5mmol/L-1.5mmol/L。

2.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，在100ml一步式胚胎培养液中所述人血清白蛋白的含量为0.45-0.55g/L，在100ml一步式胚胎培养液中杀菌剂的含量为45-55mg/L。

3.权利要求2所述的一步式胚胎培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)在百级条件下配制，按上述比例依次将氯化钠、氯化钾、硫酸镁、葡萄糖、庆大霉素、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、D-山梨醇、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱和N-乙酰基-L-半胱氨酸加到水介质中，混合后得溶液I；

2)在溶液I中冲CO₂保护气；

3)在冲CO₂保护气的过程中加入上述分量的氨基酸和人血清白蛋白，混合后得溶液II；

4)将步骤3)配置好的溶液II用0.2μm的滤膜过滤除菌后在CO₂培养箱中平衡5-10小时；

5)将步骤4)平衡好的溶液II在CO₂保护气无菌分装，得一步式胚胎培养液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中冲的为体积百分数为6-7％的CO₂；步骤5)中CO₂保护气为体积百分数为6-7％的CO₂。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中培养箱中平衡的条件为：37℃、6％的CO₂培养箱中平衡5-10小时，调节PH在7.20-7.40。