[发明专利]一步式胚胎培养液及其制备方法

说明书

本发明属于辅助生殖领域，具体涉及一种一步式胚胎培养液及其制备方法。本发明中用于制备一步式胚胎培养液的组合物，所述组合物由(±)‑α‑硫辛酸、乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐、N‑乙酰基‑L‑半胱氨酸组成；所述(±)‑α‑硫辛酸、乙酰L‑肉碱或乙酰L‑肉碱盐酸盐、N‑乙酰基‑L‑半胱氨酸的摩尔比为0.055‑0.098：0.044‑0.078：0.702‑0.858。利用该组合物制备的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞并抑制分解利用有害产物的作用，避免胚胎移植过程中可能受到的机械损伤和培养环境不同造成的应激反应而导致的囊胚形成率不高的问题。

技术领域

本发明属于辅助生殖领域，具体涉及一种一步式胚胎培养液及其制备方法。

背景技术

体外受精-胚胎移植In Vitro Fertilization-Embryo Transfer简称IVF-ET，是指分别将卵子与精子取出后，体外受精，再将胚胎前体——受精卵移植回母体子宫内发育成胎儿。试管婴儿是用人工方法让卵子和精子在体外受精并进行早期胚胎发育，然后移植到母体子宫内发育而诞生的婴儿。

自从世界上第一个“试管”婴孩于1978年7月25日在英国出生后，到2012年7月1日已有500万个“试管”婴孩诞生。IVF为全球超过占5000万不孕症夫妇带来了福音。然而，三十多年的临床实践并没有显著提高IVF的成功率。2011年，美国妊娠协会统计35岁病人IVF成功率(受孕率)在25-30％左右，而1997年也在30％左右，而婴儿出生率更低。其中一个重要的原因是IVF胚胎培养液的质量，这是IVF胚胎质量最重要的决定性因素之一。

IVF培养通常分为两种流程即两种培养液系列：全程(单/一步式培养液系列)和分程(双培养液系列)。利用双培养液系列流程对胚胎早期和后期阶段提供不同的培养液成份，但也丢失了由胚胎分泌入培养液中的重要的有效成份，如胚胎营养因子。全程培养液系列流程保留了这些重要的有效成份，但也保留了培养液中有害的分解产物。

目前使用的受精液调配的营养不全，或其物理或化学指标过余宽，同样的试验过程、同批次精液在培养过程中容易使精子或卵细胞死亡、或精子获能不足活力较低、或卵细胞生存受到影响，如在精子活力试验中，精子保持活力的比率较低，或其比率接近或低于合格标准(保持活力率≥75％)。有些受精液的稠度较高，其含有有害成份和炎细胞去除不干净，严重影响受精卵的发育成长。

另外，一般培养液在使用前不能直观地判断有效性的好坏，如果在其变质后仍继续使用将对试验或临床操作造成不可逆转的结果。因此需要开发一种无需更换培养液、含有重要有效成分并能抑制有害产物的一步式胚胎培养液。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于制备一步式胚胎培养液的组合物及一步式胚胎培养液，本发明的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞并抑制分解利用有害产物的作用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

用于制备一步式胚胎培养液的组合物，所述组合物由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、N-乙酰基-L-半胱氨酸组成；所述(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、N-乙酰基-L-半胱氨酸的摩尔比为0.055-0.098：0.044-0.078：0.702-0.858。

关键物料A：(±)-α-硫辛酸

α-硫辛酸(LA)以闭环二硫化物形式和开链还原形式两种结构混合物存在，这两种形式通过氧化-还原循环相互转换，像生物素一样，硫辛酸事实上常常不游离存在，而是以其羧基同酶分子(如二氢硫辛酸乙酰转移酶)中赖氨酸残基的ε-NH₂基以酰胺键共价结合(结构上与生物胞素十分相似)。硫辛酸享有“万能抗氧化剂”之称，在生物体内广泛存在，是一种具有广泛生物学活性的二硫化合物，具有很强的抗氧化活性，LA可以清除体内氧自由基，螯合金属离子，再生体内其他抗氧化剂来发挥抗氧化作用，保护线粒体功能、调节能量代谢。