[发明专利]一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用

说明书

本发明公开了一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用，包括以下步骤：动物分组、模型构建、肝组织脂肪染色、血脂和肝酶活性测定、免疫组织化学染色和基因表达谱分析；通过以上步骤，本发明通过建立正常肝、脂肪肝、损伤变性肝、病变肝和癌变肝的大鼠模型，检测在肝细胞恶性转化过程中CD44变化，对照组肝组织含有极微量CD44表达，脂肪肝组的鼠肝组织中CD44表达量明显高于对照组；而变性组、病变组和癌变组的鼠肝组织中CD44表达量均显著高于脂肪肝组和对照组，其中癌变组的CD44表达量最高，癌变组的CD44表达量最高，肝组织中CD44的高表达对肝细胞恶化转化过程中起促进作用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，涉及一种循环血CD44异常表达与非酒精性脂肪性肝病进展的新发现与应用，具体地说，涉及一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用。

背景技术

目前，肝细胞性肝癌(HCC)仍是我国最常见的恶性肿瘤之一。非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是遗传-环境-代谢应激相关因素所致的临床病理综合征，需排除过量饮酒史和其他明确肝损害因素，以肝细胞脂肪变性、坏死、炎性细胞浸润和脂肪积贮等为特征，可从非酒精性单纯性脂肪肝进展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）。NASH包涵肝纤维化、肝硬化（LC）和HCC疾病谱。NAFLD发病率明显上升，已为最常见慢性肝病、并逐步成为继乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染外诱发HCC的主要致病因素，已引起医学界的高度重视。经典“二次打击”学说是首次以胰岛素抵抗致肝脂肪变（脂肪肝可逆），再次是肝细胞TG储存过量致脂质过氧化及氧化应激等，为NASH发生重要原因。

人类CD44基因位于11号染色体短臂，全长约50kb，由20个高度保守外显子组成，每个外显子长度70-210 bp不等。跨膜糖蛋白CD44基因变异显著，其家族按基因含外显子类型分标准型CD44（CD44s）和变异型CD44（CD44v）。CD44阳性肝癌细胞，在体外具更强克隆形成及侵袭能力。肝癌高侵袭潜能细胞CD44s显著高表达，激活后可诱导炎症相关白介素-12、TGF-β1、Hippo-YAP、Wnt和NF-κB信号等表达，参与细胞粘附、持细胞干性，介导肿瘤侵袭和转移，增强癌细胞抵抗由化疗药物索拉菲尼诱导凋亡。新发现肝细胞脂肪积聚时CD44表达增加，在NAFLD肝病中CD44具有细胞信号调控因子介导生物学功能，但CD44如何参与调控或如何监控非酒精性脂肪性肝病肝细胞的恶性转化，尚未见报道阐明。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用，以解决背景技术中所提出的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用。

进一步的，一种CD44在监测非酒精性脂肪性肝病恶化转化过程中的应用，具体包括以下步骤：

（1）动物分组： 随机选取雄性Sprague-Dawley大鼠共94只，其中，随机选取10只为空白对照组，其余84只，随机分配为脂肪肝组和诱癌组各42只；

（2）模型构建：将步骤（1）中的94只雄性Sprague-Dawley大鼠于温度22±2℃、12 h光/暗周期和湿度55%的环境中饲养；空白对照组大鼠予以普通饲料喂养；脂肪肝组大鼠予以高脂饲料喂养；诱癌组大鼠予以高脂饲料加0.05%的2-乙酰氨基芴颗粒饲料喂养；

每两周取1只空白对照组的正常鼠、一组脂肪肝组的高脂鼠和一组诱癌组的诱癌鼠，每组六只大鼠，以乙醚麻醉，经鼠腹心脏抽取5 mL血液，分离血清置-20 ℃保存；摘取鼠肝组织，取每周摘取的鼠肝组织至少3份于10 %中性福尔马林中固定，再取每周摘取的鼠肝组织至少5份于液氮速冻后放-80 ℃冰箱保存为冰冻切片；