[发明专利]耳聋基因检测试剂盒及其产前无创耳聋基因检测方法

权利要求书

1.一耳聋基因检测试剂盒，被适用于检测GJB3基因位点(c.538C＞T)，GJB2基因位点(c.235delC,c.299_300delAT,c.176_191del16,c.35delG)，线粒体DNA位点(m.1555A＞G,m.1494C＞T)，SLC26A4基因位点(c.919-2A＞G，c.2168A＞G)的一种或其组合，其中发生突变的基因被定义为一突变基因，没有发生突变的基因被定义为一野生基因，其特征在于，所述耳聋基因检测试剂盒包括：

扩增基因位点的引物，对应所述引物的探针，以及混合液；以及

其中所述引物具有至少一组如引物名称:GF1到GF9，GR1到GR9所示的序列，所述探针对应地具有至少一组如探针名称:P1-P18所示的序列,每一序列探针包括野生型探针以及突变型探针。

2.根据权利要求1所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，其中所述野生型探针的5’端修饰荧光基团与所述突变型探针的5’端修饰荧光基团不同。

3.根据权利要求2所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，其中所述野生型探针和所述突变型探针的3’端修饰淬灭基团为MGB、BHQ等荧光淬灭基团中的一种。

4.根据权利要求1所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，所述样品为孕妇外周血中的游离DNA。

5.根据权利要求4所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，所述耳聋基因检测试剂盒进一步包括空白质控品，阴性质控品以及阳性质控品，其中所述空白质控品被实施为无菌水。

6.根据权利要求5所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，所述阴性质控品被实施为所述野生基因，所述阳性质控品被实施为所述突变基因和所述野生基因的1:1混合物。

7.根据权利要求1到6任一所述的耳聋基因检测试剂盒，其特征在于，所述引物GF1和GR1以及所述探针P1和P2被用于扩增和检测c.235delC位点；

所述引物GF2和GR2以及所述探针P3和P4被用于扩增和检测

c.299_300delAT位点；所述引物GF3和GR3以及所述探针P5和P6被用于扩增和检测c.176_191del16位点；所述引物GF4和GR4以及所述探针P7和P8用于扩增和检测c.35delG位点；所述引物GF5和GR5以及探针P9和P10用于扩增和检测c.919-2A＞G位点；所述引物GF6和GR6以及探针P11和P12用于扩增和检测c.2168A＞G位点；所述引物GF7和GR7以及探针P13和P14被用于扩增和检测m.1555A＞G位点；所述引物GF8和GR8以及探针P15和P16用于扩增和检测m.1494C＞T位点；所述引物GF9和GR9以及探针P17和P18被用于扩增和检测c.538C＞T位点。

8.一产前无创耳聋基因检测方法，被适用于检测GJB3基因位点(c.538C＞T)，GJB2基因位点(c.235delC,c.299_300delAT,c.176_191del16,c.35delG)，线粒体DNA位点(m.1555A＞G,m.1494C＞T)，SLC26A4基因位点(c.919-2A＞G，c.2168A＞G)的一种或其组合，其中发生突变的基因被定义为一突变基因，没有发生突变的基因被定义为一野生基因,包括以下步骤：

S1：获取样品基因，其中所述样品基因被实施为孕妇外周血中的游离DNA；

S2：分装检测液，其中所述检测液包括针对所述样品基因的引物，探针以及混合液，其中所述探针包括野生探针以及突变探针；

S3：添加所述样品基因至一检测液中形成一检测反应液，添加对应的质控品至另一检测液中形成一对照反应液；

S4：扩增所述检测反应液以及所述对照反应液；以及

S5：以数字PCR技术分析所述检测反应液以及所述对照反应液，计算所述样品基因中所述突变基因与所述野生基因的比例。