[发明专利]耳聋基因检测试剂盒及其产前无创耳聋基因检测方法

说明书

本发明公开了一耳聋基因检测试剂盒，其中所述耳聋基因检测试剂盒被适用于检测GJB3基因位点，GJB2基因位点，线粒体DNA位点以及SLC26A4基因位点，所述检测试剂盒包括引物序列名称:GF1到GF9，GR1到GR9所示的引物，所述探针对应地具有如探针序列名称:P1‑P18所示的探针,每一序列探针包括野生型探针以及突变型探针。本发明提供的耳聋基因检测试剂盒，通过对孕妇的无创产前检测，及早发现耳聋患儿。

技术领域

本发明属于生命科学与生物技术领域，具体涉及一耳聋基因检测试剂盒及其产前无创耳聋基因检测方法，其中所述产前无创耳聋基因检测方法通过检测孕妇外周血中的游离DNA准确判断胎儿基因型，及早发现耳聋患儿。

背景技术

先天性耳聋是新生儿最常见的出生缺陷之一，其发病率为0.1％～0.3％，据统计发现，60％的患者的耳聋与遗传因素有关。根据患者是否伴有其他器官的病症分为综合征型耳聋和非综合征型耳聋，其中非综合征型耳聋根据遗传方式不同可分为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传、X连锁和线粒体母系遗传。

在中国不同地区的非综合性耳聋患者中，最常见的耳聋易感基因有GJB2基因、SLC26A4基因、线粒体12SrRNA、GJB3基因。GJB2基因编码connextin 26，该基因突变会导致K+进入内淋巴液循环受阻，产生感音性神经耳聋，为常染色体隐性遗传，主要突变位点为c.235delC，其次是c.299_300delAT和 c.176_191del16以及c.35delG；SLC26A4基因突变会引起Pendred综合症，表现为前庭导水管扩大并伴有感音神经性耳聋，为常染色体隐形遗传，主要突变方式为c.919-2A＞G和c.2168A＞G，其次是c.2162C＞T和c.1975G＞C；线粒体12SrDNA是被发现的第一个与氨基糖苷类抗生素致聋相关的基因，主要突变是m.1555A＞G和m.1494C＞T；GJB3基因编码connextin 31，其遗传方式为常染色体隐形或显性遗传，突变位点为c.538C＞T和c.547G＞A。在中国，新生儿耳聋基因突变携带率较高的是GJB2基因突变，约占2.6％，其次是SLC26A4基因突变，约占1.9％，线粒体DNA突变占0.1％，GJB3基因突变仅在少数患者中发现。

其上提到的GJB2基因、SLC26A4基因、线粒体12S rRNA、GJB3基因中的任一种基因位点发生突变都会有可能会使得新生儿出现耳聋病症，这对于耳聋患者以及耳聋患者的家庭来说都是难以承受的。对于耳聋患者来说，这意味着可能从出生的那一刻起就听不到世界的美好声音；对于耳聋患者的家庭来说，这就意味着常人无法想象的心理和精神负担。因此，越来越多的孕妇选择孕前检测或产前诊断的方式，以减少出生缺陷儿的出生。

然而，现有技术的孕前检测只能为新生儿是否携带或致病提供一个理论概率，多数孕期的基因检测在母体携带耳聋基因的情况下，也无法判定胎儿携带突变基因的比例，给出明确诊断。换言之，即使备孕的家庭在怀孕前去做了系统的孕前检测，也不能确保其孕前检测结果的准确度。

而针对现有技术的产前检测，又存在一定的检测危险。现有技术的产前检测主要是通过胎儿绒毛或羊膜穿刺等方式来检测胎儿是否携带有致病基因，这种方式的产前检测对于胎儿和孕妇来说都存在一定的风险，因此在临床上也限制了这种有创产前检测的方式。

综上所述，寻找一种检测准确度高，对检测群体创伤小的耳聋检测方法及其设备迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于提供一耳聋基因检测试剂盒及其产前无创耳聋基因检测方法，其中所述产前无创耳聋基因检测方法应用所述耳聋基因检测试剂盒实现对孕妇的无创产前检测，以及早发现耳聋患儿。

本发明的目的在于提供一耳聋基因检测试剂盒及其产前无创耳聋基因检测方法，其中所述产前无创耳聋基因检测方法直接对孕妇外周血中提取的游离DNA 进行检测，即可获取胎儿基因型，实现对孕妇的无创检测。