[发明专利]PCA3和PSA基因检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，包括有针对PCA3和PSA基因引物和探针，其中，针对PCA3基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示，

针对PSA基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8以及SEQ ID NO.9所示。

2.根据权利要求1所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，还包括有内参引物和内参探针，所述内参引物的序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述内参探针的序列如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求1所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，还包括有外泌体沉淀溶液、RNA提取试剂、清洗液。

4.根据权利要求3所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，所述外泌体沉淀溶液的组成为：Poly(ethylene glycol)，NaCl和ddH₂O。

5.根据权利要求3所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，所述RNA提取试剂的组成为：含固量为50％的磁珠，乙醇。

6.根据权利要求3所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒，其特征是，所述清洗液的组成为：0.1M NaCl，异丙醇，乙醇，ddH²O。

7.权利要求1-6任一项所述的PCA3和PSA基因检测试剂盒的使用方法，其特征是，包括提取外泌体RNA；配置PCR反应液；进行荧光PCR反应。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征是，提取外泌体RNA的操作步骤包括：

(1)将人体尿液样本离心以获得上清液；

(2)在上清液中加入外泌体沉淀溶液，人体尿液样本和外泌体沉淀溶液的体积比为1：1，混匀，室温静置1小时/4℃过夜后，以13000rpm/分钟的速度离心10分钟，以形成外泌体沉淀物；

(3)在所述外泌体沉淀物中加入总RNA提取试剂以及抗体标记磁珠，静置10分钟，每两分钟上下颠倒5～6次，使磁珠在管內分布均匀；

(4)加入清洗液，重复清洗2遍后，加入80％乙醇；

(5)洗脱，从而获取外泌体RNA。

9.根据权利要求8所述的使用方法，其特征是，针对PCA3基因的反应液如下：

针对PSA基因的反应液如下：

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10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征是，荧光PCR反应的条件如下：

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