[发明专利]PCA3和PSA基因检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种PCA3和PSA基因检测试剂盒及其使用方法，其括有针对PCA3/或PSA基因引物和探针，其中，针对PCA3基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、以及SEQ ID NO.3所示，针对A基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、以及SEQ ID NO.9所示。所示PCA3和PSA基因检测试剂盒，通过采集人体尿液进行外泌体RNA的提取，通过检测PCA3mRNA和PSA mRNA，测定PCA3mRNA/PSA mRNA比值，计算PCA3评分，从而实现早期诊断前列腺肿瘤，无创取样，避免前列腺穿刺，减轻病人痛苦，同时具有较高的灵敏度、高特异性和稳定性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及PCA3和PSA基因检测试剂盒及其应用。

背景技术

在世界范围内，前列腺癌发病率位居男性恶性肿瘤第二位。近年来，我国前列腺癌发病率逐渐升高，多数地区新确诊患者中晚期比例高于欧美国家，这将对我国前列腺癌患者的治疗效果及长期生存产生直接影响。以前我国前列腺癌发病率较低，但近年来呈显著上升趋势。自2008年起，前列腺癌已成为泌尿系统发病率最高的恶性肿瘤，国内前列腺癌发病率城乡差异较大，特别是大城市的发病率更高。近年来发现的前列腺癌新的标记物PCA3，在前列腺癌中高表达，可反应前列腺癌进展情况。PCA3位于9号染色体，含有4个外显子，为非编码的mRNA，通过选择性剪切和多聚腺苷酸化产生至少四种不同的转录产物。 RT-PCR分析显示PCA3仅在前列腺组织中表达，在其他组织中不表达。PCA3在95％的检测的全部前列腺癌中过度表达，可从前列腺癌变细胞中无害测定，且准确度接近100％。此外，在前列腺外组织(良性和恶性)中尚未检测到PCA3转录，证明PCA3是目前已知前列腺癌最具特异性的PCa标志物。PCA3不受年龄，前列腺体积或其他前列腺病的影响。 Northern blot检测分析50例患者中47例PCA3高度表达，而前列腺良性病变组织中不表达或低度表达。文献(cancerres.，2002，May1；62(9)2695-8)报道比较端粒酶RNA和 PCA3 RNA作为前列腺癌的标记物，PCA3指示作用更优。PCA3作为目前为止针对前列腺癌特异性最优的标志物，含有4个外显子，三个内含子，Gandini et al2003等文献报道，与其它外显子相比，PCA3外显子4用于前列腺癌检测特异性最优。PCA3基因特异性地高表达于人类前列腺癌细胞和转移坏死灶中，在正常前列腺、良性前列腺增生细胞中不表达或低表达。PSA主要有前列腺细胞合成，在其他组织细胞中不表达或低表达，PSA RNA表示样本中的前列腺特异性细胞的量。之前的检测，主要通过前列腺穿刺实现，通过尿液无创检测，可以减少部分患者不必要的前列腺穿刺，减轻病人痛苦。因此，建立通过以尿液为样本，且检测效果好的试剂盒就非常有必要，而且通过检测结果，判断是否还需要做进一步的前列腺穿刺。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种PCA3和PSA基因检测试剂盒，该检测试剂盒只需要以尿液作为检测样本，不需要进行前列腺穿刺就能得到很好的检测结果，而且，可以指导是否需要前列腺穿刺。

实现上述目的技术方案如下。

一种PCA3和PSA基因检测试剂盒，包括有针对PCA3和PSA基因引物和探针，其中，针对PCA3基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3所示，

针对PSA基因的引物和探针序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8以及SEQ ID NO.9所示。

在其中一个实施例中，还包括有内参引物和内参探针，所述内参引物的序列如SEQID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述内参探针的序列如SEQ ID NO.6所示。

在其中一个实施例中，还包括有外泌体沉淀溶液、裂解液、RNA提取试剂和清洗液。