[发明专利]一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法

说明书

本发明利用健康组织块法培养脐带和胎盘的间充质干细胞，再以消化法培养脂肪干细胞；并将其培养过程所分泌的细胞因子，进行调配，经成纤维细胞增殖曲线测试，找出最佳生长浓度，并将调配好的培养上清低温冷冻干燥，配制好适宜的溶媒，作为美容产品的原料，后期可添加至其他美容产品中制备干细胞美容产品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法。

背景技术

随着人们物质生活水平的逐渐提高，吃饱穿暖对人们来说不再是难题，生活的富裕使得人们开始追求更高层面的生活。爱美之心人皆有之，所有人都希望自己能够永远年轻、漂亮，很多人都将目光转向了各种能提升自己的外表形象的方法。皮肤作为人体最大的组织器官，覆盖于人体的外表，是美学美容研究的主要组织器官。一时之间，各种化妆品、护肤品等如同雨后春笋一样的应运而生了。然而，市面上的这些化妆品只是通过遮掩缺陷或是在皮肤表层起作用来达到美丽的目的，只是治标，而不能治本。人们渐渐也不满足这样的效果，将目光聚集到了搜寻能从根本上美容的方法。

研究表明，皮肤表皮细胞的自我更新、再生修复以及衰老退变是由来自毛囊或表皮基底层的成体干细胞——表皮干细胞的增殖分化所决定的。研究表明，干细胞能激活机体整体上处于休眠状态下的各种干细胞群，以替代更新原有的因衰老或病理性等因素所造成组织细胞的衰退和老化，达到组织器官功能的恢复，增强组织器官的活性和原有的抗耐受力，改善因衰老等因素所造成的细胞与细胞间、细胞与细胞外基质间的信息传递，增强和加快各组织细胞的新老更替等作用。

传统的干细胞美容需要将干细胞注射进皮肤真皮层，对操作者的要求较高，且此项操作对爱美人士容易产生心理负担，有安全性的困扰。而现在研究发现，干细胞培养过程种所分泌的细胞因子，通过涂抹，此类细胞因子因为是小分子物质，极易被水通道运输渗透至皮肤真皮层，可以达到刺激“唤醒”或营养表皮或真皮干细胞。这些细胞因子所唤醒的作用是：

1、在表皮水平上：影响角化细胞的活性和生长因素，刺激角化细胞迁移和上皮化，刺激表皮细胞分化和矫正，强烈促进表皮修复和愈合。

2、在真皮水平上：刺激成纤维细胞活性，增强细胞外基质收缩和构造，提供皮肤养分促进皮肤伤口愈合和功能再生。

3、在皮肤整体水平上：增强对环境侵袭、紫外线、污染物、刺激物、敏化剂、炎性细胞的抵抗力，巩固、增强皮肤张肌，增强皮肤弹性，刺激疤痕组织褪色，减少瘢痕形成，延缓皮肤衰老。

其主要机制有：①促进表皮和真皮层细胞(特别是成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞)增殖、分裂、分化，新生细胞增多，使皮肤增厚，逐渐恢复皮肤正常结构和生理功能；②促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成，调节胶原蛋白和粘多糖的分泌，维持皮肤组织中水分含量和电解质代谢，改善萎缩皮肤的缺水状态，滋润皮肤组织；③通过对血管内皮细胞的作用，促进皮肤组织不断形成新的毛细血管。

皮肤干细胞激活所需要的细胞因子较为多样，且浓度不一，不同干细胞培养过程中所分泌的细胞因子浓度也有所差异，利用干细胞分泌的细胞因子进行天然的调和配比，达到皮肤干细胞所需最佳浓度，将为美容产品原料的制备提供基础，是本发明着重要研究的内容。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种用于多重干细胞复合冻干粉及溶媒的制备方法，包括以下步骤：

⑴、脐带、胎盘间充质干细胞的分离培养

在无菌条件下，收取健康的脐带和胎盘；在GMP实验室生物安全柜将胎盘剪碎至1.5-2.5mm³大小的组织块，将所述组织块分别置于T175培养瓶所盛的DMEM-LG细胞培养液中，置37℃，5％CO₂培养箱中培养；