[发明专利]一种快速筛选合成米格列醇关键中间体突变菌株的方法及菌株

权利要求书

1.一种高活力诱变菌株，其特征在于所述高活力诱变菌株为氧化葡糖杆菌(Gluconobacter oxydans)ZJB16009，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCCNo.M201703，保藏日期为2017年1月6日，地址：中国武汉武汉大学，邮编430072。

2.一种权利要求1所述氧化葡糖杆菌CCTCC No.M201703在催化合成米格列醇中间体6NSL中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：以N-羟乙基葡萄糖胺为底物，以氧化葡糖杆菌CCTCC No.M 201703经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，加入七水硫酸镁，以去离子水为反应介质，构成pH 5.0反应体系，在15℃进行转化反应，反应完全后，获得含6NSL的反应液，将反应液分离纯化，获得6NSL；所述反应体系中，底物终浓度为40～100g/L，七水硫酸镁终浓度1～10g/L，催化剂用量以湿菌体重量计为40～60g/L。

4.如权利要求1所述高活力诱变菌株，其特征在于，所述诱变菌株的筛选方法为：将野生氧化葡糖杆菌经诱变处理后的诱变菌株进行发酵培养，取发酵培养后的诱变菌株湿菌体细胞加入底物反应液中，在15℃转化反应完全后，将反应液离心，取上清加入DNPH显色溶液，37℃保温15min后加入NaOH水溶液终止反应并测定445nm处吸收峰值，根据6NSL标准曲线，获得上清中6NSL含量，根据6NSL含量筛选获得合成米格列醇关键中间体的高活力突变菌株；所述底物反应液终浓度组成为：N-羟乙基葡萄糖胺60g/L、七水硫酸镁5g/L，pH 5.0，溶剂为去离子水；所述DNPH显色溶液是将DNPH用HCl水溶液溶解后加去离子水配制而成；所述6NSL标准曲线是将6NSL用去离子水配制成不同浓度梯度，与上清相同条件下测定445nm处吸收峰值，以不同梯度浓度为横坐标，以吸收峰值为纵坐标制备而成。

5.如权利要求4所述的高活力诱变菌株，其特征在于所述DNPH显色溶液中，HCl水溶液体积用量以DNPH质量计为50-300mL/g，DNPH终浓度为20mmol/L。

6.如权利要求4所述的高活力诱变菌株，其特征在于所述DNPH显色溶液与上清体积比为1:4-6，所述DNPH显色溶液与NaOH水溶液体积比为1:1，所述NaOH水溶液浓度为8mol/L。

7.如权利要求4所述的高活力诱变菌株，其特征在于所述6NSL标准曲线按如下方法制备：将6NSL用去离子水分别配制成浓度5g/L、10g/L、20g/L、30g/L、40g/L和50g/L的6NSL标准液，分别吸取150μL不同浓度的6NSL标准液滴加至96孔板中，加入25μL、20mM的DNPH显色溶液混合，于37℃恒温保温15min，加入25μL、8M的NaOH水溶液停止反应，测试在445nm的吸收峰值，以6NSL浓度为横坐标，以吸收峰值为纵坐标制作而成。