[发明专利]一种同时检测瓜类细菌性果斑病菌和角斑病菌的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.由引物对AC-3和引物对PSL-7组成的引物对组合在制备辅助检测西瓜或甜瓜中西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种的试剂盒中的应用；

所述检测在LGC分子检测平台进行；

所述引物对AC-3由引物AC-F和引物AC-R组成；

所述引物对PSL-7由引物PSL-F和引物PSL-R组成；

所述引物AC-F为序列表中序列3所示的单链DNA分子；

所述引物AC-R为序列表中序列4所示的单链DNA分子；

所述引物PSL-F为序列表中序列5所示的单链DNA分子；

所述引物PSL-R为序列表中序列6所示的单链DNA分子；

所述引物对AC-3中一条引物的5’末端含有接头序列甲；

所述引物对PSL-7中一条引物的5’末端含有接头序列乙；

接头序列甲和接头序列乙可结合不同的信号基团。

2.权利要求1中所述引物对组合在辅助检测西瓜或甜瓜中西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种中的应用；

所述检测在LGC分子检测平台进行。

3.权利要求1中所述引物对组合在辅助检测待测种子中是否含有或疑似含有西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种中的应用；

所述辅助检测在LGC分子检测平台进行；

所述待测种子为待测西瓜种子或待测甜瓜种子。

4.辅助检测待测种子上是否携带细菌性果斑病菌和细菌性角斑病菌的方法，包括如下步骤：

(1)以待测种子的浸提液为模板，采用权利要求1中所述引物对组合进行PCR扩增，得到反应产物；

(2)读取反应产物的荧光信号，然后进行如下判断：

①如果仅读取到接头序列甲结合的信号基团的荧光信号，则待测种子上携带西瓜嗜酸菌；

②如果仅读取到接头序列乙结合的信号基团的荧光信号，则待测种子上携带丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

③如果读取到接头序列甲结合的信号基团的荧光信号和接头序列乙结合的信号基团的荧光信号，则待测种子上携带西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

④如果读取不到荧光信号，则待测种子上不携带西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

所述辅助检测在LGC分子检测平台进行；

所述待测种子为待测西瓜种子或待测甜瓜种子。

5.辅助检测待测种子上是否携带西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种的方法，包括如下步骤：

(1)以西瓜嗜酸菌的基因组DNA、丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种的基因组DNA、水或待测种子的浸提液为模板，采用权利要求1中所述引物对组合进行PCR扩增，得到反应产物；

(2)读取反应产物的荧光信号，进行聚类分析，然后进行如下判断：

①如果待测种子的反应产物仅和细菌性果斑病菌的基因组DNA的反应产物聚群，则待测种子上携带西瓜嗜酸菌；

②如果待测种子的反应产物仅和细菌性角斑病菌的基因组DNA的反应产物聚群，则待测种子上携带丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

③如果待测种子的反应产物不与细菌性果斑病菌的基因组DNA、细菌性角斑病菌的基因组DNA和水的反应产物聚群，则待测种子上携带西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

④如果待测种子的反应产物仅和水的反应产物聚群，则待测种子上不携带西瓜嗜酸菌和丁香假单胞杆菌黄瓜角斑病致病变种；

所述辅助检测在LGC分子检测平台进行；

所述待测种子为待测西瓜种子或待测甜瓜种子。