[发明专利]一种分离提纯蛋清溶菌酶的方法

权利要求书

1.一种分离提纯蛋清溶菌酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)蛋清预处理：将蛋清搅拌均匀后，过80～120目滤网得蛋清滤液；

(2)树脂预处理：取树脂用蒸馏水洗涤至无明显杂质并滤干，先用盐酸溶液浸泡后，再用蒸馏水冲洗得树脂A；树脂A在氢氧化钠溶液浸泡后，用蒸馏水冲洗得树脂B；其中，树脂选自724大孔弱酸性阳离子交换树脂、732型阳离子交换树脂、D152大孔弱酸性阳离子交换树脂中的一种；

(3)吸附：往蛋清滤液中加入步骤(2)所得树脂B，搅拌混匀后静置吸附，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，得树脂L；

(4)洗脱：向步骤(3)所得树脂L中加入NaCl溶液，搅拌洗脱，滤出洗脱液，重复洗脱合并所得洗脱液，保留滤出洗脱液后的树脂；

(5)超滤：将步骤(4)所得洗脱液先置于截留量为50KD的超滤离心管中，离心并取下层液；后将下层液置于截留量为3KD的超滤离心管中，离心并取上层截留液，即得到所述溶菌酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中蛋清滤液与树脂B的体积比为10：2～4，控制蛋清滤液pH值为6～10。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中蛋清滤液与树脂B的体积比为10：2.4～2.5。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中蛋清滤液pH值为9.0～9.5。

5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述NaCl溶液的浓度为0.5～2.5mol/L，所述搅拌洗脱的频率为60～100r/min，时间为20～100min。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述NaCl溶液为1～1.5moL/L，搅拌洗脱时间为60～80min，NaCl溶液的用量为步骤(1)所述蛋清滤液体积的0.5～1倍。

7.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述截留量为50KD离心管的转速为4000～6000g，离心时间为5～15min；所述截留量为3KD离心管的转速为6000～7000g，离心时间为50～70min。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述截留量为50KD离心管的转速为5000g，离心时间为10min；所述截留量为3KD离心管的转速为6500g，离心时间为60min。

9.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述树脂预处理，将树脂浸泡于2～4倍树脂体积的0.8～1.2mol/L盐酸溶液，浸泡时间为10～12h，用蒸馏水冲洗至流出液pH值为5.5～6.5，得树脂A；再将树脂A浸泡于2～4倍树脂体积的0.8～1.2mol/L氢氧化钠溶液，浸泡时间为10～12h，用蒸馏水冲洗至流出液pH值为8.5～9.5，得树脂B。

10.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述滤出洗脱液后的树脂作为树脂A继续进行步骤(2)制备树脂B。