[发明专利]一种MALDI-TOF质谱探针在制备γ-谷氨酰转肽酶检测试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及一种MALDI‑TOF质谱探针在制备γ‑谷氨酰转肽酶检测试剂盒中的应用，用于GGT酶的定量分析以及相关抑制剂药物的筛选，相对比现有技术降低了分子探针合成成本和劳力，规避了光谱中基底光信号、光散射和光致漂白等现象干扰，实现了细胞溶菌体和人血清中GGT酶的快速和准确分析，可在MALDI靶板上实现对几百个样品的同时分析，大大提升了分析速度和效率。

技术领域

本发明属于分析测试技术领域，具体涉及一种MALDI-TOF质谱探针在制备γ-谷氨酰转肽酶检测试剂盒中的应用。

背景技术

γ-谷氨酰转肽酶(GGT)对于维持体内谷胱甘肽和半胱氨酸的代谢具有重要作用，作为一个带有朝向细胞外表面活性位点的胞外酶，GGT能够特异性催化细胞外谷胱甘肽中γ-谷酰基的断裂产生半胱氨酸-甘氨酸，然后通过二肽酶进一步水解为半光氨酸和甘氨酸。由于恶性细胞对半胱氨酸的强依赖性，这种GGT触发的过程潜在地为肿瘤细胞的存活和繁殖提供了有利条件。所以，临床以GGT酶为肝胆疾病诊断的重要指标，广泛应用与肝病及其他脏器疾病的诊断和预后检测，此外，GGT酶是一种重要的癌症标志物，其在肝癌、子宫癌和宫颈癌等癌症中均出现高表达。

目前大部分的GGT检测基于比色法和荧光法，光谱法伴随着一定的限制，如需要荧光或者发色基团标签、合成困难较大、对激发条件要求较高、生物样品自发荧光干扰以及分子探针的光致漂白和猝灭现象。

另一个供选择的方法是质谱法，与光谱法相比质谱具有三大分析优势：一、质谱不需要发光标签或者对标签没有较高的要求，通过荷质比的准确测定来完成定性定量分析。这样就避免了复杂的高成本的探针合成过程；二、质谱能够同时检测多个化合物，包括底物，产物和内标，这样使得质谱扫描具有高度的灵活性，这种独一无二的性质使得质谱可以同时表征多个酶的活性和同时扫描针对不同酶的抑制剂；第三、质谱分析没有了来自光谱分析中自发荧光、光散射等因素的限制，这些优势可以降低假阳性分析结果。由于基质辅助激光解析离子化(MALDI)质谱高灵敏度、高耐污染物能力以及高通量(几百个靶点同时分析以及软件自动化)的分析特点，MALDI质谱已经成为用于蛋白酶的活性分析和抑制剂药物的筛选的重要工具。因此亟需一种低成本、高灵敏、大通量的MALDI相配套的质谱探针用于GGT定量分析和药物筛选。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于γ-谷氨酰转肽酶(GGT)检测的MALDI-TOF质谱探针，用于GGT酶的定量分析以及相关抑制剂药物的筛选，相对比现有技术降低了分子探针合成成本和劳力，规避了光谱中基底光信号、光散射和光致漂白等现象干扰，实现了细胞溶菌体和人血清中GGT酶的快速和准确分析，可在同一靶板上实现对几百个样品的同时分析，大大提升了分析速度和效率。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种MALDI-TOF质谱探针在制备γ-谷氨酰转肽酶检测试剂盒中的应用，式I为MALDI-TOF质谱探针，式II为内标，所述的式I和式II的结构式具体如下：

本发明提供一种用于γ-谷氨酰转肽酶检测的MALDI-TOF质谱探针的使用方法，步骤如下：

a、配置不同浓度的GGT酶标准品的PBS溶液中，每种浓度的PBS溶液中均加入式Ⅰ的分子探针的储备液，发生不同程度的酶切反应；之后加入式II的内标溶液，混匀后取1μL样品与1μL基质在靶板上混合，干燥后进样分析；

b、制作标准曲线：以步骤a中GGT酶的不同活性值为横坐标，以步骤a中所述式II的MALDI信号强度占所述式I和式II信号总强度的比值物(I_II/I_I+I_II)为纵坐标，绘制标准曲线；