[发明专利]合成辛伐他汀的重组菌株、方法以及相关酶有效

申请号：	201810112817.6	申请日：	2018-02-05
公开（公告）号：	CN109402085B	公开（公告）日：	2021-02-12
发明（设计）人：	吕雪峰;梁波;杨勇;黄雪年;郑玲辉;滕云	申请（专利权）人：	中国科学院青岛生物能源与过程研究所;浙江海正药业股份有限公司
主分类号：	C12N9/18	分类号：	C12N9/18;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/06;C12R1/19
代理公司：	北京信诺创成知识产权代理有限公司 11728	代理人：	陈悦军
地址：	266101 山***	国省代码：	山东;37
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摘要：
搜索关键词：	合成辛伐他汀重组菌株方法以及相关
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【权利要求书】：

1.一种2-甲基丁酸侧链水解酶，为：

(1)PcEST/D106G：其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

(2)PcEST/S304G：其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；

(3)PcEST/D106G/Q140L：其氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；或

(4)PcEST/D106G/Q140L/S304G：其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。

2.一种生物材料，为：

(1)核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1所述的2-甲基丁酸侧链水解酶；或者

(2)包含(1)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞或重组微生物。

3.根据权利要求2所述的生物材料，其中，所述核酸分子为PcEST/D106G：其核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示、PcEST/S304G：其核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示、PcEST/D106G/Q140L：其核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示或PcEST/D106G/Q140L/S304G：其核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示。

4.权利要求1所述的2-甲基丁酸侧链水解酶在水解含有2-甲基丁酸侧链的他汀类物质中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述含有2-甲基丁酸侧链的他汀类物质为洛伐他汀、美伐他汀或普伐他汀。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其中，所述他汀类物质为酸式、内酯式或盐式。

7.一株用于合成辛伐他汀的重组菌株，所述重组菌株同时表达权利要求1所述的2-甲基丁酸侧链水解酶和酰基转移酶。

8.根据权利要求7所述的重组菌株，其中，所述重组菌株为大肠杆菌。

9.根据权利要求8所述的重组菌株，其中，所述重组菌株为大肠杆菌BL21(DE3)菌株。

10.根据权利要求7所述的重组菌株，其中，所述酰基转移酶的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。

11.根据权利要求7～10任一项所述的重组菌株，其中，所述重组菌株携带有2-甲基丁酸侧链水解酶的编码基因和酰基转移酶的编码基因。

12.根据权利要求11所述的重组菌株，其中，所述2-甲基丁酸侧链水解酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:12、14～15或18任一项所示，所述酰基转移酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

13.一种构建权利要求7～12任一项所述的重组菌株的方法，包括步骤：将携带有权利要求1所述的2-甲基丁酸侧链水解酶的编码基因的质粒和携带有酰基转移酶编码基因的质粒共转化大肠杆菌，经筛选得到同时表达2-甲基丁酸侧链水解酶和酰基转移酶的重组菌株。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述2-甲基丁酸侧链水解酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:12、14～15或18任一项所示，所述酰基转移酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

15.权利要求7～12任一项所述的重组菌株或其菌悬液或其发酵液或其菌粉在合成辛伐他汀中的应用。