[发明专利]一种以化橘红为基础制备多糖的方法

权利要求书

1.一种以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、预处理：将化橘红干果，低温烘干，粉碎，过40-50目筛，得到黄化橘红粉末，加入石油醚，浸泡过夜，过滤，弃除石油醚，粉末挥干溶剂，加入体积分数为80％乙醇于80℃下水浴浸泡1h，弃除单糖和苷类，过滤，得到滤液与滤渣，滤液可用于制备柚皮苷，滤渣挥干溶剂，备用；

所述步骤一的低温为50-60℃，粉碎为机械粉碎；所述石油醚与化橘红粉末的料液比为1:6g/mL；所述80％乙醇与化橘红粉末的料液比为1:6g/mL；

步骤二、提取：以水为溶剂，将预处理后的化橘红粉末置于水浴中浸泡提取，过滤，得滤液；

步骤三、浓缩：用真空旋转蒸发浓缩滤液；

步骤四、醇沉：上述所得浓缩液中加入95％食用酒精，静置过夜，过滤，滤饼依次用无水乙醇，丙酮洗涤两遍，于60℃下真空干燥；

步骤五、脱蛋白：将步骤四干燥后所得固体用水溶解，加入三氯乙酸，搅拌，室温下静置30min，然后离心取上清液，用氢氧化钠溶液调节至中性，加入95％食用酒精，静置过夜，过滤，洗涤，于60℃下真空干燥，得到粗多糖；

步骤六、纯化：取粗多糖加水溶解，加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，置过夜，4000r/min离心15min，得到沉淀和上清液；

步骤七、酸性多糖的制备：将步骤六所得的沉淀加入NaCl溶液使其溶解，然后加入95％的食用酒精，静置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水溶解，然后置于透析袋中透析，冻干，得化橘红酸性多糖；

步骤八、中性多糖的制备：将步骤六所得的上清液用硼酸(H₃BO₃)调成pH＝6.0～7.0，然后滴加NaOH溶液调节pH＝10～12，析出沉淀后，离心分离沉淀、上清液；上清液备用，沉淀用NaCl溶液溶解后，用乙酸调至中性，加入95％食用酒精沉淀，静置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水溶解，然后置于透析袋中透析24h，冻干，得到化橘红中性多糖；

步骤九、碱性多糖的制备：取步骤八所得的上清液，用乙酸调pH＝3～4，加入95％食用酒精，静置过夜，过滤，沉淀用蒸馏水溶解，然后置于透析袋中透析24h，冻干，得到化橘红碱性多糖；

所述步骤九中乙酸的质量分数为2％；所述95％食用酒精与溶解后溶液的体积比为3:1～4:1。

2.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤二的提取温度为85～100℃，料液比为1:20～1:40g/mL，提取时间为2.5～3.5h。

3.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤三的浓缩温度为60～70℃。

4.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤四中加入95％食用酒精的量与浓缩液的体积比为3:1～4:1。

5.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤五中样品溶解后得到的溶液浓度为10～20mg/mL；所述三氯乙酸的质量分数为5～8％；所述样品溶液与三氯乙酸溶液的体积比为8:1～10:1；所述氢氧化钠的浓度为2mol/L；所述95％食用酒精与溶解后溶液的体积比为3:1～4:1。

6.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤六中粗多糖加入溶解后得到的溶液浓度为15～30mg/mL；所述CTAB溶液的质量分数为1～3％；粗多糖溶液与CTAB的体积比3:1～1:1。

7.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤七中NaCl溶液的质量分数为5～10％；所述95％食用酒精与溶解后溶液的体积比为3:1～4:1。

8.如权利要求1所述的以化橘红为基础制备多糖的方法，其特征在于：所述步骤八中H₃BO₃的质量分数为1％，所述NaOH溶液的浓度为2mol/L，所述NaCl的质量分数为5～10％，乙酸的质量分数为2％，所述95％食用酒精与溶解后溶液的体积比为3:1～4:1。