[发明专利]一种预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物

说明书

本发明公开了一种预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物，包括基于公共大数据的预后标志物的筛选、预后标志物的验证和预后标志物的效力检测。本研究首次发现并证实了ANO1联合MMP3蛋白可以作为预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物，其预测效力与目前临床常用的单纯利用临床信息进行预后预测的第八版TNM分期相当，两种方法联合使用能够显著提高食管鳞状细胞癌患者预后预测的准确性。研究同时发现ANO1基因在食管鳞状细胞癌患者癌组织中呈高表达，其表达增高能够促进食管鳞状细胞癌的增殖、侵袭和转移，利用shRNA敲降ANO1基因的表达可以显著抑制食管鳞状细胞癌在体内及体外水平的进展。

技术领域

本发明涉及一种食管鳞状细胞癌预测预后的生物标志物，具体为一种预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物，属于食管鳞状细胞癌预测预后的生物标志物应用领域。

背景技术

食管癌是最常见的恶性肿瘤之一，在全世界范围内，食管癌发病率在所有恶性肿瘤中位居第八位，死亡率位居第六位，全球每年约有45000人罹患该病。与西方国家多为食管腺癌不同的是，食管鳞状细胞癌（食管鳞癌）在我国占食管癌总体发病率的95%以上。食管鳞癌目前主要的治疗手段为外科手术、放射治疗和化学治疗。虽然近十余年来，虽然食管鳞癌的综合治疗手段不断进步，但其预后仍不甚理想，目前其五年总体生存率仅为15%-25%。探索和研究食管鳞癌预后的影响因素，建立相对准确的预后预测模型，针对不同预后患者采用个体化的治疗方案，以期提高患者的治愈率和延长生存时间，在我国有着极为特殊的临床意义。

目前临床上常用于评估食管鳞癌预后的指标为第八版的TNM分期，主要依据食管鳞癌原发灶浸润深度、分化程度、肿瘤部位、有无淋巴结及远处转移等临床因素来预测食管鳞癌患者的远期生存情况。这一方法简单易用，但缺点在于没有考虑到食管鳞癌本身分子机制的差异导致的影响。大量研究证实，同一TNM分期而不同预后的食管鳞癌患者肿瘤组织内存在大量差异性表达的基因，这些差异性表达的基因引起了肿瘤细胞在代谢、运动能力、粘附性及外分泌功能等方面的改变，从而导致肿瘤细胞表现为不同的侵袭性与转移性。因此，探寻食管鳞癌发生发展过程中的关键预后分子，利用其建立较为精准的预后预测模型并作为治疗靶点进行个体化治疗是当今肿瘤研究的热点和方向，也是提高人类对恶性肿瘤的认识，并改善肿瘤患者生存及预后的必经之路。

发明内容

本发明的目的在于为了解决上述问题而提供了一种预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的，一种预测食管鳞状细胞癌预后的生物标志物，其特征在于：包括基于公共大数据的预后标志物的筛选、预后标志物的验证和预后标志物的效力检测，

所述基于公共大数据的预后标志物的筛选包括以下步骤：

（1）检索GEO数据库，搜索同一食管鳞状细胞癌患者队列组织样本的DNA测序及RNA芯片数据；

（2）寻找同时满足在DNA水平基因拷贝数变异频发及mRNA水平表达显著差异的基因，获得三个候选基因ANO1、MMP3和GAL。

优选地，所述预后标志物的验证包括组织芯片的构建和ANO1、MMP3和GAL基因表达检测，所述组织芯片的构建包括利用苏木精-伊红染色切片选择有代表性的组织区域和利用亲和素-生物素复合物法进行免疫组化分析。

优选地，所述代表性的组织区域包括癌组织和癌旁组织，所述癌组织中癌细胞的细胞数量大于该癌组织中细胞总量的80%，所述癌旁组织中不含癌细胞。

优选地，所述ANO1、MMP3和GAL的基因表达检测的工具包括试剂盒，所述试剂盒包括能够定量ANO1基因mRNA表达水平的试剂，以及能够定量ANO1、MMP3和GAL基因蛋白表达水平的试剂。