[发明专利]一种制备雷公藤甲素的方法

说明书

本发明公开了一种制备雷公藤甲素的方法。存在于雷公藤中的雷公藤内酯酮、雷公藤甲素、雷公藤乙素和2‑表雷公藤乙素结构非常接近，其中雷公藤乙素和2‑表雷公藤乙素为一对手性异构体，分离难度大。现有技术在分离这四种化合物时，无不依赖于反复硅胶柱层析，然而反复硅胶柱层析耗费溶剂、重现性差，只适合于实验室少量分离，难以在工业生产中推广。目前工业生产中，唯一在使用的柱色谱只有大孔树脂。本发明提供的方法不依赖于反复硅胶柱层析即可分离制备雷公藤内酯酮、雷公藤甲素、雷公藤乙素和2‑表雷公藤乙素。本发明提供的HPLC方法基于常规的C18色谱柱即可有效分离手性异构体雷公藤乙素和2‑表雷公藤乙素，成本低、重复性高。

技术领域

本发明属于化学领域，涉及已知化合物的制备方法和分离分析方法，具体涉及一种制备雷公藤内酯酮、雷公藤甲素、雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素的方法以及雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素的HPLC分离分析方法。

背景技术

研究发现，存在于雷公藤中的四种结构非常类似的化学成分具有优异的抗肿瘤活性，分别为：雷公藤内酯酮、雷公藤甲素、雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素。结构式如下：

从化学结构可以发现，这四个化合物结构非常接近，其中雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素为一对手性异构体。这导致这四个化合物的分离难度非常大。现有技术在分离这四种化合物时，无不依赖于反复硅胶柱层析，然而反复硅胶柱层析耗费溶剂、重现性差，只适合于实验室少量分离，难以在工业生产中推广。目前工业生产中，唯一在使用的柱色谱只有大孔树脂。

因此，一种基于大孔树脂的分离方法有助于实现上述四种化合物的工业化生产制备。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种制备雷公藤内酯酮、雷公藤甲素、雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素的方法及雷公藤乙素和2-表雷公藤乙素的HPLC分离分析方法。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

雷公藤内酯酮的制备：

一种制备雷公藤内酯酮的方法，包括如下步骤：

步骤S1，提取：将卫矛科植物雷公藤的干燥根粉碎，乙醇溶液冷浸提取，回收提取液中的乙醇并用水稀释，过滤，收集滤液作为大孔树脂上样液；

步骤S2，XDA-1B大孔吸附树脂富集：以XDA-1B大孔吸附树脂为分离介质并装柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用12BV的35％乙醇以12BV/h的流速清洗，后用8BV的75％乙醇(含万分之一三乙胺，体积百分含量)以12BV/h的流速洗脱并收集5-8BV洗脱液；将收集的洗脱液浓缩至干即得粗品；

步骤S3，碱开环酸闭环精制：将步骤S2所得粗品使用pH值为9.5的碱水溶解，过滤去除不溶物，滤液再用酸调节pH值至6.5，低温析晶，过滤收集析出物，洗涤、干燥，用65％乙醇(含万分之一三乙胺，体积百分含量)溶解作为上样液；

步骤S4，DM130大孔吸附树脂分离：以DM130大孔吸附树脂为分离介质并装柱，树脂径高比为1:20，拌样树脂占树脂总量的1/20，湿法装柱，拌树脂上样；用9BV的65％乙醇(含万分之一三乙胺，体积百分含量)以4BV/h的流速洗脱并收集8-9BV洗脱液，8-9BV洗脱液浓缩干燥即得雷公藤内酯酮。

优选地，步骤S1提取的固液比为1:5，1kg干燥根对应用5L的乙醇溶液冷浸提取。

优选地，步骤S1用95％乙醇冷浸提取。

优选地，步骤S1回收提取液中的乙醇后用水稀释至0.5g生药/mL，过滤，收集滤液作为大孔树脂上样液。

优选地，步骤S2拌样树脂质量为上样液对应生药质量的1/2。