[发明专利]一种双特异性抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种双特异性抗体及其制备方法和应用。所述双特异性抗体，其从N端到C端包含：肝癌细胞表面抗原GPC3对应抗体；重链恒定区；和免疫细胞表面抗原对应抗体。本发明的双特异性抗体可同时识别肝癌细胞表面抗原和免疫细胞表面抗原，实现免疫细胞对肝癌细胞的靶向杀伤。同时，本发明的双特异性抗体作为桥梁连接免疫细胞和肝癌细胞，可增加免疫细胞与肝癌细胞的接触时间，有效增强免疫细胞对肝癌细胞的杀伤作用。由于同时结合了两种抗原，本发明的双特异性抗体可有效激活免疫细胞，拉近免疫细胞与肝癌细胞的距离，增加效靶比，增强免疫细胞的杀瘤能力。

技术领域

本发明涉及免疫领域，特别是涉及一种双特异性抗体及其制备方法和应用。

背景技术

双特异性抗体(bispecific antibody，BsAb)是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，产生导向性的效应功能，其在免疫治疗中具有广阔的应用前景。

肝癌是发生于肝脏的恶性肿瘤，死亡率较高，分为原发性和继发性两大类，目前的治疗方法有手术治疗、放射治疗等。

如何提供一种用于治疗肝癌的双特异性抗体，对于肝癌治疗具有重要的意义。

目前，常见的双特异性抗体构型以简单地串联两个单链抗体(single—chainantibody fragment，scFv)为主，这种构型分子量小，容易到达肿瘤微环境，但是由于不含重链恒定区(也称为Fc(Fragment crystallizable)段)，稳定性差。

发明内容

本发明提供一种双特异性抗体及其制备方法和应用。所述双特异性抗体为Fc单链构型，能够同时结合免疫细胞和肝癌细胞，提高杀瘤效率。

本发明一方面提供一种双特异性抗体，其从N端到C端包含：

肝癌细胞表面抗原GPC3对应抗体；

重链恒定区；和

免疫细胞表面抗原对应抗体。

本发明的双特异性抗体中，优选地，所述肝癌细胞表面抗原GPC3对应抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQNTHVPPTFGQGTKLEIKGGGGSQVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKRYNPALKSRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARINPAWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)

本发明的双特异性抗体中，优选地，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:2)

本发明的双特异性抗体中，优选地，所述免疫细胞表面抗原对应抗体可为CD16a对应抗体或CD3对应抗体，其中，CD16a对应抗体的氨基酸序列可如SEQ ID NO:3所示，CD3对应抗体的氨基酸序列可如SEQ ID NO:4所示。