[发明专利]一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建在审
| 申请号： | 201810120349.7 | 申请日： | 2018-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN108251413A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;李兰娟;洪雪娟;朱丹华;应俊 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N15/07 | 分类号： | C12N15/07;C12N5/22 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 310006 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杂交瘤 骨髓瘤细胞 细胞融合 细胞因子 融合剂 构建 生物医学领域 体外长期培养 制备细胞因子 免疫磁珠法 抗HIV感染 聚乙二醇 细胞结合 选择培养 培养基 分选 活化 制备 | ||
1.一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，CD4+T细胞和骨髓瘤细胞经含有PHA、IFN-γ、SP2/0-IgG、CD4+T-IgG和SPA的预融合剂处理，IgGFc段与SPA结合而IgGFab段分别与CD4+T细胞、SP2/0细胞结合，形成的结合物拉近了被融合细胞的距离，易于在聚乙二醇的作用下发生融合，获得能在体外长期培养并能产生IFN-γ、IL-2、IL-4细胞因子的杂交瘤CD4+T细胞株。
2.根据权利要求1所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，所述预融合剂包括(1)基础液：在DMEM培养基中配入浓度为5μg/ml植物血凝素、5.5μg/LIFN-γ；(2)应用液：先在基础液中配入与骨髓瘤细胞等效价的抗骨髓瘤细胞抗体，再配入与骨髓瘤细胞等效价的抗CD4+T细胞抗体，最后配入与骨髓瘤细胞等效价的金黄色葡萄球菌A蛋白，临用前配制并置37℃1h使用。
3.根据权利要求1、2所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，融合前处理是指将CD4+T细胞与骨髓瘤细胞以10∶1-5∶1的比例加入离心管中，混和均匀，1000r/m离心5min，弃去上清，轻轻敲打管底至细胞无颗粒状沉淀，加入2ml预融合剂的应用液，37℃2小时，1000r/m离心5min，弃去上清，轻轻敲打管底至细胞无颗粒状沉淀。
4.根据权利要求1所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，所述骨髓瘤细胞为SP2/0。
5.根据权利要求1所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，所述聚乙二醇的浓度为30％。
6.根据权利要求1、2所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，所述抗骨髓瘤细胞抗体为抗CD138抗体。
7.根据权利要求1、2所述的一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于，所述抗CD4+T细胞抗体为抗CD4抗体。
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