[发明专利]一种用于制备细胞因子的杂交瘤T细胞株的构建

说明书

一种用于生物医学领域细胞因子制备的杂交瘤T细胞株的构建，其特征在于以免疫磁珠法分选的CD4⁺T细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)经含有PHA、IFN‑γ、SP2/0‑IgG、CD4⁺T‑IgG和SPA的预融合剂处理，在PHA和IFN‑γ的活化下，IgGFc段与SPA结合而IgGFab段各自与CD4⁺T细胞、SP2/0细胞结合，依赖于SPA和IgG的作用，将CD4⁺T细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)连接在一起，进而在低浓度融合剂聚乙二醇(PEG1000‑2000)的作用下使两种细胞融合，经细胞融合培养基(HAT)选择培养，获得能在体外长期培养、能产生IFN‑γ、IL‑2、IL‑4细胞因子的抗HIV感染的杂交瘤CD4⁺T细胞株。

技术领域

本发明涉及生物医学领域中艾滋病的生物细胞治疗。

背景技术

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)引起的传染病， 在全球广泛流行，根据世界卫生组织(WHO)和联合国艾滋病规划署的有关报告，自1981年 美国发现首例艾滋病病例以来，至今全球有208个国家和地区受到了艾滋病的严重威胁，约 有4000万人感染了艾滋病，死亡人数已超过2000万，每天约有6000人成为艾滋病感染者， 同时每天约有300多人死于艾滋病。在中国HIV感染者正处于高速增长期，目前已远超过100 万。艾滋病已经成为继肿瘤、心脑血管疾病、结核病、糖尿病后又一个人类面临的重大感染 性疾病，已成为全球关注的严重的公共卫生和社会问题。

从目前已用于临床的艾滋病治疗方法看，效果不很理想：(1)HIV逆转录酶抑制剂：仅 能防止尚未感染HIV的易感细胞感染，对已感染的细胞没有治疗作用，且毒副作用较多，包 括腺粒体毒性、骨髓抑制、红细胞性贫血、粒细胞和血小板减少、胰腺炎，加之交叉耐药性 的产生，这类药已不单独使用，主要做联合用药，且易产生耐药变株，导致临床疗效下降或 失效。(2)HIV蛋白酶抑制剂：易产生药物性肝损伤、脂质代谢紊乱等毒副作用及耐药性。(3) HIV整合酶抑制剂：通过抑制HIV病毒DNA与宿主细胞DNA整合而发挥作用，与HIV逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合同时使用对抗病毒有协同作用。(4)抑制HIV病毒进入抑制剂： 包括阻断gp120与CD4结合、阻断HIV与辅助受体结合、作用于gp41膜亚单位及作用于T淋 巴细胞表面CC趋化因子受体5(CCR5)来阻断HIV进入宿主细胞，但对肝和心脏有副作用。(5)细胞因子治疗：主要用于调节T细胞动态平衡。(6)HIV疫苗治疗：由于HIV的特殊性， 如固有免疫不足以抵御HIV及其靶向破坏免疫系统，病毒突变迅速，导致至今尚未开发出真正安全有效的疫苗。(7)基因治疗：HIV基因治疗的研究从未间断，包括反义技术、RNA诱 饵、RNA干扰、细胞内抗体、显性阴性突变体、自杀基因等，但进入II期临床试验阶段的基 因疗法几乎没有。(8)单克隆抗体被动免疫疗法：通过下调CD4+T细胞表面CCR5来降低HIV 的易感性、延缓艾滋病的进展和减少HIV的扩散，中和单克隆抗体2G12、2F5和4E10应用于 HIV感染者具有良好的耐受性和安全性，能延缓但不能阻止病毒的反弹(9)过继性免疫细胞 治疗：体外大量培养HIV自体的CD4+T细胞时会导致病毒大量扩增，增加病毒感染的CD4+T 细胞数量，而回输CD4+T细胞可能会增加体内病毒复制的场所，导致病毒载量反弹，总体上看，过继性免疫细胞治疗无明显的毒副作用，也未取得满意的治疗效果。