[发明专利]检测SA肠毒素SEI的试剂及制备方法和试剂盒

说明书

本发明公开了快速检测SA(金黄色葡萄球菌)肠毒素SEI的试剂及制备方法和所构成的试剂盒，通过基因工程技术制备了SA重组肠毒素SEI，并与抗SA肠毒素SEI单克隆抗体和羊抗鼠IgG配合组装成ICCGIC试纸条，实现针对液体奶中SA肠毒素SEI的快速、简便、准确的检测。

技术领域

本发明涉及一种检测SA(金黄色葡萄球菌)肠毒素SEI的试剂及制备方法和所构成的试剂盒，特别是一种快速检测SA肠毒素SEI的试剂及制备方法和所构成的试剂盒，属生物技术领域。

背景技术

SA(金黄色葡萄球菌，Staphylococcus aureus，)是一种引起奶牛乳房炎(Bovinemastitis)最常见的病原微生物。

近年来，随着我国奶牛养殖业的快速发展，奶牛乳房炎已经成为对奶牛场危害最大、投入药费最多、防治最难的疾病之一，它不仅严重影响奶牛的产乳量，而且患病牛产生的牛奶中含有大量的SA及其分泌肠毒素，可引起食物中毒，直接危害人类健康。

肠毒素(Enterotoxins，SEs)是SA在生长繁殖过程中产生的一类能够引起急性胃肠炎的外毒素，在低浓度就能够产生致毒活性。SA肠毒素对热稳定，易溶于水和盐溶液。虽然在高温(100℃、30min)或低pH值环境条件下SA很容易就被杀灭，但是由SA产生的肠毒素仍然具有活性，并且肠毒素能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用，因此当人食入后污染SA的食物后引起中毒。目前，已经发现的SA肠毒素包括传统肠毒素[SEA、SEB、SEC(SEC1、SEC2、SEC3、SEC ovine、SEC bovine variants)、SED和SEE]、新型肠毒素(SEG、SEH、SEI、SER、SES、SET)和类肠毒素(SElJ、SElK、SElL、SElM、SElN、SElO、SElP、SElQ、SElU、SElU2和SEl V等)三个类型20余个不同的种型。

在产肠毒素的SA菌株中，含有携带不同肠毒素基因的可移动基因元件及毒素基因，并在特定的条件下表达产生肠毒素引起食物中毒。SEA是目前最常见污染食品的肠毒素，也是被认为SA引起食物中毒最主要的肠毒素，它单独存在或与其他肠毒素基因共同存在。

1969-1990年，在英国发生的359次中毒事件中，的SA菌株产生SEA。与荧光相似，法国、美国、韩国发生的食物中毒事件中，分别有79％、69.7％和90％的SA菌株产生SEA。与传统肠毒素相比，对新型肠毒素研究相对较少，但有许多研究报道编码新型肠毒素的基因在食源性SA分离株中具有高携带率，并且通过口服实验证实新型肠毒素SEG、SEH、SEI、SER、SES和SET同样具有严重催吐活性。

由于SA不同分离菌株之间产生的肠毒素种类差异较大，同一株SA可以产生多种毒素，因此肠毒素的检测也越来越受到研究者的重视。

目前，SA肠毒素的检测主要依赖于动物接种试验、免疫学试验和分子生物学方法。

动物接种试验是较早被用于检测肠毒素的一种方法，常选用幼鼠和猿类为受试对象，喂食或腹腔注射含有肠毒素的SA菌株纯培养液，当动物发生感染后会产生明显的临床症状。然而，由于各种动物对肠毒素反应的灵敏性相差较大，因而易产生假阴性结果；加之时间和养殖成本较高，限制了该方法的推广应用。

目前，检测SA肠毒素常用的免疫学方法主要包括反向被动胶乳凝集(RPLA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶联免疫化学发光检测法(CLIA)法。RPLA法已经应用于SA肠毒素的检测，但PRLA由于价格昂贵，且所能检测的血清型有限(主要是SEA和SEB)，限制了其广泛使用。

与传统的动物接种试验相比，ELISA和CLIA法具有灵敏、简单、快速的优点，现已推出商品化的ELISA试剂盒。

然而，由于SA不同的肠毒素之间同源性较高，同时内源性酶类、葡萄球菌A蛋白和基质蛋白等会干扰检测，极易引起假阳性反应的发生。