[发明专利]一种多组分检测控制蛴螬含量的方法

说明书

本发明公开了一种多组分检测控制蛴螬含量的方法，该方法为定量测定蛴螬中尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷成分，检测时色谱条件为，Waters HSS T3色谱柱；检测波长为260 nm；流速为1.0 mL·min^‑1；柱温为30℃；进样量为5µL；以乙腈为流动相A，水为流动相B进行梯度洗脱；该测定方法简单、专属性强、分离效果好，精密度、重现性高，稳定性良好，能够有效的为蛴螬药材的质量评价提供科学依据。

技术领域

本发明属于中药材技术领域中质量检测方法，具体涉及了一种多组分检测控制蛴螬含量的检测方法。

背景技术

蛴螬为金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子Holotrichia diomphalia Bates的干燥幼虫，收载于《中药大辞典》下册，第二版3224页，为我国习用药材，具有破瘀、散结、止痛和解毒的功效，外用可治疗丹毒、痔漏、跌打损伤。内服可用于妇女经闭、症瘕。主血瘀经闭，症瘕；折伤瘀痛；痛风；破伤风；喉痹；痈肿；丹毒等。在治疗眼部疾病以及抗肿瘤、提高免疫力等方面具有良好作用。

蛴螬为成方制剂大黄虫丸、大虻虫丸、干漆丸、山茱萸丸、天浆子丸等的组方用药，蛴螬被列入《中国药典》附录中。现有地方标准收录该药材，这些标准中含量测定采用定氮法测定，为蛋白质通用方法。少量文献报道中，蛴螬采用氨基酸测定进行质量评价，但针对蛴螬的质量控制不具有专属性研究，而且未见有采用高效液相色谱法测定含量的报道。因蛴螬未有完善的质量标准控制方法，地方标准不具有专属性，且国内数十家药品企业生产的中成药中均用到了蛴螬药材，鉴于企业发展与需求，建立蛴螬的质量标准，有助于推行业的规范与发展，为质量评价和控制提供科学、有效的方法和依据。此外，建立蛴螬质量标准对于提升药品质量起到关键作用，具有重要的社会效益和经济效益。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种多组分检测控制蛴螬含量的检测方法，具体包括以下步骤：

步骤1、尿嘧啶对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶对照品6.01mg，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得尿嘧啶对照品溶液；

步骤2、胞苷对照品溶液的制备：精密称取胞苷对照品5.03mg，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得胞苷对照品溶液；

步骤3、次黄嘌呤对照品溶液的制备：精密称取次黄嘌呤对照品10.05mg，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得次黄嘌呤对照品溶液；

步骤4、黄嘌呤对照品溶液的制备：精密称取黄嘌呤对照品10.08mg，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得黄嘌呤对照品溶液；

步骤5、尿苷对照品溶液的制备：精密称取尿苷对照品5.02mg，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得尿苷对照品溶液；

步骤6、肌苷对照品溶液的制备：精密称取肌苷对照品5.09mg，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得肌苷对照品溶液；

步骤7、鸟苷对照品溶液的制备：精密称取鸟苷对照品5.04mg，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得鸟苷对照品溶液；

步骤8、混合对照品溶液制备：分别精密吸取尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷对照品溶液各1ml，至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得混合对照品溶液；

步骤9、供试品溶液的制备：称取混匀蛴螬药材细粉(过五号筛)0.5021g，置具塞锥形瓶中，精密加入超纯水50mL，混匀，50℃超声处理30min，放冷，离心机14000rpm，离心5min，0.45μm微孔滤膜滤过即得；

步骤10、高效液相色谱测定：