[发明专利]一种mPEG-Mal5000修饰β-淀粉酶的方法

权利要求书

1.一种mPEG-Mal5000修饰β-淀粉酶的方法，其特征在于包括以下步骤：向试管中加入8.0 mL pH 6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，再分别加入125μmol/L β-淀粉酶酶液1.0 mL和500μmol/L mPEG-Mal5000溶液1.0 mL，置于58℃恒温金属浴中震荡10min，取反应液进行透析24h，将透析液在20℃下真空浓缩至2.0mL后进行真空冷冻干燥；其中，β-淀粉酶与mPEG-Mal5000的摩尔比、恒温金属浴的温度和磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH由以下步骤得到：

（1）mPEG-Mal5000修饰β-淀粉酶向试管中加入8.0 mL磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，再分别加入125μmol/L β-淀粉酶酶液1.0 mL和1.0 mL mPEG-Mal5000溶液，置于恒温金属浴中震荡10min~30min，取反应液进行透析24h，待透析完毕，将透析液在20℃下真空浓缩至2.0mL，测定比酶活力；

（2）实验设计与统计分析

改变mPEG-Mal5000溶液浓度使β-淀粉酶与mPEG-Mal5000的摩尔比为1:1~1:6、恒温金属浴的温度为25℃~75℃、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH为3.0~8.0，进行单因素实验，测定比酶活力；根据单因素试验结果，选取比酶活力影响较显著的β-淀粉酶与mPEG-Mal5000的摩尔比、恒温金属浴的温度、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH这三个因素，并对其进行实验因素与水平的设定，然后进行实验；

（3）模型的建立和统计分析根据所得数据进行多元回归分析，得到响应变量β-淀粉酶与mPEG-Mal5000的摩尔比B、恒温金属浴的温度C、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH值A与响应值比酶活力Y的二次多项回归方程：Y=2.15+0.025*A+0.00528*B+0.016*C-0.033*A*B+0.027*A*C+0.0011*B*C-0.17*A²-0.13*B²-0.13*C²；

（4）试验结果分析与优化

根据回归方程进行绘图分析，得到回归方程的响应面三维图，响应值由此得到优化，根据模型分析可得到β-淀粉酶与mPEG-Mal5000的摩尔比、恒温金属浴的温度和磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH的最优化工艺参数。

2.如权利要求1所述mPEG-Mal5000修饰β-淀粉酶的方法，其特征在于：所述步骤（1）中恒温金属浴中震荡反应时间为10min。