[发明专利]一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法在审
| 申请号： | 201810126622.7 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108085358A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 陈振师;吴鹏飞;杨彦超;安鹏丽;赵颖 | 申请（专利权）人： | 保定冀中药业有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/08 | 分类号： | C12P21/08;C12P21/06;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知识产权代理有限公司 11467 | 代理人： | 贾凯 |
| 地址： | 071000*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 琼脂糖 洗脱 单克隆抗体 细小病毒 层析柱 流出液 上清液 洗脱液 泵入 洗杂 种犬 制备 清洗 木瓜蛋白酶酶解 装入层 透析 平衡 | ||
1.一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、采用木瓜蛋白酶酶解犬细小病毒单克隆抗体IgG2b后，装入截留分子量小于10KD的透析袋中，于结合Buffer中进行透析，然后将酶解液于4℃12000rpm离心20min，弃沉淀，得上清液；
所述酶解用酶解体系为：10mg/mL犬细小病毒单克隆抗体IgG2b，0.5mg/ml木瓜蛋白酶，10mmol/L-半胱氨酸，2mmol/L EDTA，去离子水定容，pH7.6；酶解时间4h；
步骤二：将琼脂糖-Protein G和琼脂糖-Protein L分别装入层析柱中，分别用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，得琼脂糖-Protein G层析柱和琼脂糖-Protein L层析柱，备用；
步骤三、将步骤一所得的上清液泵入琼脂糖-Protein G层析柱中，收集流出液；然后用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，再用5-10倍柱体积的洗脱Buffer洗脱Fc片段，收集洗脱液A，即Fc片段；
步骤四、将步骤三收集的流出液泵入琼脂糖-Protein L层析柱中，然后10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，再用5-10倍柱体积的洗脱Buffer洗脱Fab片段，收集洗脱液B，即IgG2b-Fab片段。
2.根据权利要求1所述的一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，
步骤一和步骤二中所述结合Buffer为：0.15M NaCl,20mM Na
步骤三和步骤四中所述洗杂Buffer为：0.15M NaCl,20mM Na
步骤三和步骤四中所述洗脱Buffer为：0.1M甘氨酸，pH 3.0。
3.根据权利要求1所述的一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，步骤二中将琼脂糖-Protein G和琼脂糖-Protein L分别装入层析柱时，琼脂糖-Protein G和琼脂糖-Protein L的装入高度均小于等于15cm。
4.根据权利要求1所述的一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，还包括步骤五、按洗脱液B与中和液体积比5：1，向步骤四收集的洗脱液B中，加入中和液，使洗脱液B的PH为7，储藏，备用。
5.根据权利要求4所述的一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，步骤五所述中和液为：1M Tris-HCl，pH8.5。
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