[发明专利]一种体外仿生评价微生物降解霉菌毒素的方法

权利要求书

1.一种体外仿生评价微生物降解霉菌毒素的方法，其特征在于，包括步骤如下：

(1)将饲料通过仿生消化法进行消化；

(2)在消化后的体系中加入微生物和培养基组分，进行降解培养；

(3)培养结束后，烘干体系水分，采用免疫亲和柱-高效液相色谱法检测降解前后体系中的霉菌毒素的含量，计算得到霉菌毒素的降解率；

所述霉菌毒素降解率的计算公式如下：

霉菌毒素的降解率＝[(未加微生物和培养基的对照组样品中霉菌毒素含量－加微生物和培养基组分的试验组样品中霉菌毒素含量)/未加微生物和培养基的对照组样品中霉菌毒素含量×100％]/干物质消化率；

所述干物质消化率的计算方法为：干物质消化率＝(消化前干物质重-消化后干物质重)/消化前干物质重×100％；

所述仿生消化法包括：体外模拟动物口腔、胃、小肠三部分消化道，其中：

口腔模拟的方法为：称取一定量的饲料加入缓冲溶液中，调节pH到6.8，混匀；然后加入淀粉酶溶液，得到口腔模拟体系，摇床消化1-3h；

胃模拟的方法为：在消化后的口腔模拟体系加入HCl溶液，调节pH至2.0，加入酸性外源酶混悬液，混匀，得到胃模拟体系，封口，摇床消化4-8h；

小肠模拟的方法为：在消化后的胃模拟体系中加入NaOH溶液，调节pH至6.8，加入肠道外源酶混悬液，得到肠道模拟体系，封口，摇床消化15-20h；

所述淀粉酶溶液为3-8mg/mL；所述酸性外源酶混悬液为15-25mg/mL的混悬液；所述肠道外源酶混悬液包括：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶；其中，蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的三者的总质量和果胶酶、纤维素酶、甘露聚糖酶和木聚糖酶四者的总质量比为3-5:1，所述蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的质量比＝1:1:1、2:1:1或3:1:1，所述蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶三者的总浓度为5-10mg/mL；

所述方法中饲料、缓冲溶液、淀粉酶溶液、HCl溶液、酸性外源酶混悬液、NaOH溶液、肠道外源酶混悬液的质量、体积比为：2g：20-30mL：1-1.5mL：8-12mL：1-1.5mL：4-7mL：2-3mL；

所述霉菌毒素为呕吐毒素；

所述微生物为能降解呕吐毒素的细菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在步骤(1)之前，设置一系列不同的肠道外源酶混悬液用于体外仿生消化法，测定用不同肠道外源酶混悬液的仿生消化法消化后的饲料的干物质消化率，通过最高干物质消化率，确定仿生消化法中使用的最优肠道外源酶混悬液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为0.1M、pH6.0的PBS缓冲溶液；所述HCl溶液为0.2M的HCl溶液，所述NaOH溶液为0.6M的NaOH溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述摇床消化的条件为：温度为37-39℃，转速为150r/min。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述降解培养的方法为：37℃培养箱中避光培养48h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微生物为枯草芽孢杆菌。