[发明专利]一种脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒及扩增方法在审
| 申请号： | 201810126749.9 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108570497A | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 李芳;薛玲玲;黄立安 | 申请（专利权）人： | 广东新开源达乐生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 熊娴;冯子玲 |
| 地址： | 510375 广东省广州市荔湾区花*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 位点 扩增试剂盒 扩增模板 早期诊断 标志物 脑梗 引物特异性 扩增产物 扩增体系 灵活选择 一盒多用 多重PCR 试剂盒 错配 引物 检测 | ||
1.一种脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒，其特征在于，脑梗早期诊断标志物为人血浆内胱硫醚β－合成酶CBS，所述试剂盒包括两对扩增引物、Taq酶、dNTPs和扩增体系缓冲液，其中扩增引物用于扩增CBS 844ins68位点和CBS C699T位点，CBS 844ins68位点的扩增模板选自序列表SEQ ID NO:1所示的序列中，CBS C699T位点的扩增模板选自序列表SEQID NO:2所示的序列中。
2.根据权利要求1所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中用于扩增SEQ ID NO：1所示片段的上游扩增引物序列如序列表SEQ ID NO:3所示，下游扩增引物序列如序列表SEQ ID NO:4所示。
3.根据权利要求1所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上游扩增引物序列如序列表SEQ ID NO:5所示，下游扩增引物序列如序列表SEQ ID NO:6所示。
4.根据权利要求1所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒，其特征在于：所述扩增试剂盒还包括全血扩增缓冲液，缓冲液含有100mmol/L Tris-HCl和50mmol/L KCl，pH9.3～9.5。
5.根据权利要求1所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒：其特征在于，所述扩增试剂盒还包括DMSO和/或BSA。
6.一种采用根据权利要求1～5所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增试剂盒的快速扩增方法，其特征在于，扩增试剂盒采用25μL PCR扩增体系同时扩增两个目的片段，目的片段为选自序列表SEQ ID NO:1所示的序列中的CBS 844ins68位点，和自序列表SEQ ID NO:2所示的序列中的CBS C699T位点。
7.根据权利要求6所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增方法，其特征在于，所述扩增体系具体包括：
1×PCR buffer 2μL；
Mg2+1μL；
dNTPs 0.6μL；
Taq酶 0.3μL；
模板DNA 2μL；
CBS 844ins68位点上下游引物各1μL；
CBS C699T位点上下游引物各1μL；
无菌双蒸水补齐至25μL。
8.根据权利要求6所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增方法，其特征在于，所述扩增方法的具体扩增条件为：94℃预变性5.5min；然后94℃变性30s，60℃退火90s，72℃延伸1min，30个循环。
9.根据权利要求6所述的脑梗早期诊断标志物的快速扩增方法，其特征在于：所述扩增方法采用提取的人全血DNA作为扩增模板。
10.一种根据权利要求1～9任一项所述的脑梗早期诊断标志物的特异性引物组在制备快速扩增试剂盒中的应用，其特征在于：所述特异性引物组在制备脑梗早期诊断试剂盒中的应用。
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