[发明专利]牡蛎活性多肽的制备方法

权利要求书

1.牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述牡蛎活性多肽的制备方法包括：

预处理：取新鲜的长牡蛎，清洗干净，取出牡蛎肉，高速匀浆机匀浆，将匀浆经异丙醇脱脂后晾干粉碎即得脱脂粉，以蒸馏水稀释脱脂粉并调节pH值，在102-105℃温度下灭菌15-20分钟即得发酵基质；

发酵：接种米曲霉种子液进行发酵培养，发酵结束后，将发酵液煮沸12-15分钟灭酶，8000-9600r/min离心30-45分钟，上清液过0.2-0.25μｍ微孔滤膜，滤液即为水解液；

纯化：收集水解液，稀释后分别通过截留分子质量为1、3、6KDa的超滤膜进行超滤，得到分子量为<1KDa、1-3KDa、3-6KDa、>6KDa的多肽组分，将各组分经凝胶柱层析收集各洗脱组分混合，将混合多肽液进行低温干燥即得牡蛎活性多肽。

2.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述预处理步骤中，异丙醇脱脂操作为：按照肉液比1:4-6的比例将牡蛎肉匀浆与异丙醇混合均匀，在32-35℃温度下反应3-5小时，过滤，在4500-5000r/min转速下离心20-30分钟。

3.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述预处理步骤中，发酵基质中脱脂粉的质量分数为15-18%，pH值为6.8-7.0。

4.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述发酵步骤中，种子液的接种量为发酵基质体积的4-5%。

5.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述发酵步骤中，随种子液接种入发酵基质1.2-1.4‰的4-苯基丁酸、0.3-0.32‰（R）-乳酸乙酯。

6.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述发酵步骤中，发酵培养的摇床转速为140-160r/min，发酵温度为28-30℃，发酵培养时间为48-72小时。

7. 根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述纯化步骤中，凝胶柱层析步骤为：采用Sephadex G-50葡聚糖凝集柱层析法，以纯水为流动相，流速为2-3mL/min，在210、280 nm下测定其紫外吸收，并收集洗脱组分。

8.根据权利要求1所述的牡蛎活性多肽的制备方法，其特征在于：所述纯化步骤中，稀释操作为：用去离子水将水解液配成质量浓度为10-15mg/mL的样液。