[发明专利]牡蛎活性多肽的制备方法

说明书

本发明公开了牡蛎活性多肽的制备方法，包括：预处理、发酵、纯化，首先将长牡蛎肉匀浆后以异丙醇脱脂，调节浓度、pH值后灭菌得发酵基质，将米曲霉种子液接种入发酵基质中进行发酵培养，将水解液经超滤、凝胶柱层析得各洗脱组分，混合得牡蛎活性多肽。有益效果为：以发酵法制备牡蛎活性多肽，牡蛎糖原回收率和蛋白回收率分别可达85%和90％，蛋白质水解为多肽后，变成了易于吸收、溶解性好、乳化性好、具有多种生理活性的水解液，改善了蛋白质的功能特性，提高了蛋白质的营养及利用价值。

技术领域

本发明涉及牡蛎加工领域，尤其是涉及牡蛎活性多肽的制备方法。

技术背景

牡蛎（ostreagigastnunb）及其近缘动物的全体，是海产贝壳。在亚热带、热带沿海都适宜蚝的养殖，我国分布很广，北起鸭绿江，南至海南岛，沿海皆可产蚝。蚝乃软体有壳，依附寄生的动物，咸淡水交界所产尤为肥美。牡蛎是软体动物，有两个贝壳，一个小而平，另一个大而隆起，壳的表面凹凸不平。肉供食用，又能提制蚝油。肉，壳，油都可入药，也叫蚝或海蛎子。

牡蛎壳含80%～95%的碳酸钙、磷酸钙及硫酸钙，并含镁、铝、硅及氧化铁等，牡蛎壳煅烧后碳酸盐分解，产生氧化钙等。牡蛎含糖原、牛磺酸、10种必需氨基酸、谷胱甘肽、维生素A、B1、B2、D，无机质如铜、锌、锰、钡、磷及钙等，其中所含的亮氨酸、精氨酸、瓜氨酸含量最丰富，是迄今为止人类所发现的含量最为高的海洋物种之一。我国广东、福建台湾养殖较多。肉味鲜美，含有丰富蛋白质、脂肪和肝糖，可以鲜食或烹食，也可加工制成蚝豉或蚝油。

发明内容

本发明的目的在于提供牡蛎活性多肽的制备方法，利用米曲霉发酵牡蛎肌肉蛋白制备活性多肽的成本更低，水解反应较温和，水解过程易控，发酵水解速度较快，同时牡蛎活性多肽得率与纯度较高，具有良好的抗氧化作用，可用于制作抗氧化功能制剂用于医药及食品添加剂。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：牡蛎活性多肽的制备方法，包括：预处理、发酵、纯化，具体包括以下步骤：

预处理：取新鲜的长牡蛎，清洗干净，取出牡蛎肉，高速匀浆机匀浆，按照肉液比1:4-6的比例与异丙醇混合均匀，在32-35℃温度下反应3-5小时，过滤，在4500-5000r/min转速下离心20-30分钟，晾干粉碎即得脱脂粉，以蒸馏水稀释脱脂粉至质量分数为15-18%，调节pH值至6.8-7.0，在102-105℃温度下灭菌15-20分钟即得发酵基质；经脱脂处理后，牡蛎蛋白的含量增高，无用的脂肪等杂质被清除，既提高了发酵效率，又避免了脂肪对米曲霉发酵的影响；

发酵：以发酵基质4-5%体积份的米曲霉种子液接种，在140-160r/min转速、28-30℃温度条件下发酵培养48-72小时；发酵结束后，将发酵液煮沸12-15分钟灭酶，8000-9600r/min离心30-45分钟，上清液过0.2-0.25μｍ微孔滤膜，滤液即为水解液；在此发酵条件下，牡蛎糖原回收率和蛋白回收率分别可达85%和90％，蛋白质水解为多肽后，变成了易于吸收、溶解性好、乳化性好、具有多种生理活性的水解液，改善了蛋白质的功能特性，提高了蛋白质的营养及利用价值，同利用商品蛋白酶酶解牡蛎肌肉蛋白相比，利用米曲霉发酵牡蛎肌肉蛋白制备活性多肽的成本更低，水解反应较温和，水解过程易控；

纯化：收集水解液，用去离子水配成质量浓度为10-15mg/mL的样液，分别通过截留分子质量为1、3、6KDa的超滤膜进行超滤，得到分子量为<1KDa、1-3KDa、3-6KDa、>6KDa的多肽组分，将各组分经凝胶柱层析收集各洗脱组分混合，将混合多肽液进行低温干燥即得牡蛎活性多肽；将发酵多肽分段提取后能显著提高多肽的利用率，避免了活性多肽的浪费，牡蛎活性多肽具有较强的自由基清除能力、亚铁离子螯合能力和还原力，因此具有良好的抗氧化作用，可用于制作抗氧化功能制剂用于医药及食品添加剂。