[发明专利]基于微流控芯片的降钙素原检测试剂盒及制备和检测方法

权利要求书

1.一种基于微流控芯片降钙素原PCT试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)微流控芯片包被：取PCT抗体M7402，加入至pH9.6的CB缓冲液中，按照单个芯片25μL加入微流控芯片的反应腔室内，温浴后对芯片进行清洗；

(2)荧光微球标记：取PCT抗体M7413加入至荧光微球溶液中，并涡旋混匀，其中，荧光微球是经过活化处理的，反应结束后，加入终止液对反应进行终止，后离心清洗，加入封闭液进行封闭，封闭后的荧光微球进行离心清洗，使用微球储存液进行保存；

(3)微流控芯片组装：向微流控芯片的反应腔室预先进行封闭处理，封闭液添加后在烘箱下进行烘干处理，在封闭后的中层芯片背部反应腔室下部内加入所述步骤(2)中的荧光微球溶液，于真空烘箱中真空干燥，荧光微球在芯片中呈现小液滴形态，不发生扩散；

芯片准备完毕后采用超声键合的方式，依据芯片结构依次将滤血垫，加样密封垫，导电橡胶，吸水纸以及密封圈加入芯片内部，将三层芯片按照超声键合线完成合并；

(4)定标品的制备：定标品由A组分和B组分构成；

根据抗原浓缩液的估算浓度，用定标品稀释液将抗原浓缩液稀释作为定标品抗原母液备用；

定标品稀释液即为定标品A组分，浓度为0.5ng/mL，2-8℃保存；

定标品B组分：用定标品稀释液将PCT抗原母液稀释至2ng/mL，2-8℃保存；

(5)得基于微流控芯片的降钙素原PCT试剂盒；

在所述步骤(2)中，所述荧光微球活化处理的方法为：称取EDC使用Mes缓冲液配置成为1mg/mL的溶液，量取0.5mg羧基荧光微球，微球固含量为10mg/mL，体积即为50μL，置于EP管中，加入0.45mL Mes缓冲液稀释，从1mg/mL的EDC活化剂溶液中取5μL迅速加入微球溶液中，涡旋混匀，于超声清洗器中超声10min，后置于滚轴混匀器上震荡反应20min，总反应时间为30min；

在所述步骤(3)中，所述封闭液含有2％BSA、0.5％Tween-20、10％海藻糖以及0.2％甘露醇。

2.根据权利要求1所述的基于微流控芯片降钙素原PCT试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，封闭处理的方法为：向微流控芯片的反应腔室预先进行封闭处理，其中中层芯片的背面反应腔室内需要添加6μL+6μL的封闭液进行封闭，下层正面的反应腔室内，分别需要添加5μL+5μL+5μL的封闭液进行封闭。

3.根据权利要求1所述的基于微流控芯片降钙素原PCT试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述微流控芯片为三片式结构，包括由上到下依次层叠的上层芯片、中层芯片以及下层芯片；上层芯片、中层芯片以及下层芯片两两之间均通过定位柱、定位孔配合连接的方式实现相互间的层叠。

4.一种采用权利要求1-3任一项所述的制备方法得到的基于微流控芯片的降钙素原PCT试剂盒，包括有微流控芯片，其特征在于，还包括有定标品，所述定标品由A组分和B组分构成，其中，定标品稀释液即为定标品A组分，浓度为0.5ng/mL；定标品B组分为用所述定标品稀释液将PCT抗原母液稀释至2ng/mL；荧光微球标记的抗体试剂在所述微流控芯片内进行干燥存放；另一PCT抗体包被在微流控芯片反应腔内。