[发明专利]HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒及其制备方法

权利要求书

1.HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒，包括磷脂壳膜,其特征在于：磷脂壳膜上载有抗肿瘤药物10-HCPT，磷脂壳膜上修饰有DC-胆固醇、两侧连有半胱氨酸的穿膜肽，磷脂壳膜外层吸附有透明质酸；两侧连有半胱氨酸的穿膜肽为CG-TAT-GC；

HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒由如下方法制备而成：

A.DSPE-CG-TAT-GC的合成，其操作步骤如下：

(1)DSPE-PEG-NHS的合成

(a)称取磷脂-聚乙二醇-羧基溶于二氯甲烷，按1:3:2.5摩尔比加入N-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺，在37.5℃搅拌反应12小时；

(b)反应完成后过滤，用无水乙醚进行洗涤后过滤，复溶后反向层析纯化，真空干燥，得到DSPE-PEG-NHS；

(2)DSPE-CG-TAT-GC的合成

(a)分别将DSPE-PEG-NHS和两侧连有半胱氨酸的穿膜肽溶于二甲基亚砜，向两侧连有半胱氨酸的穿膜肽加入等摩尔比的三乙胺，20mM巯基乙醇；

(b)将CG-TAT-GC加入到DSPE-PEG-NHS中，搅拌反应2小时，加入三倍体积的水稀释，调pH2～3终止反应；

(c)透析过夜，反向层析纯化后，冷冻干燥得DSPE-CG-TAT-GC；

B.HA/CPPs-10-HCPT-NPs的制备，其操作步骤为：

(1)称量：称取10mg二棕榈酰磷脂酰胆碱，2mg DSPE-CG-TAT-GC，1.5mg DC-胆固醇，1mg抗肿瘤药物10-HCPT原药粉末；

(2)溶解：加入10ml甲醇和10ml三氯甲烷溶解；

(3)旋转蒸发：使用旋转蒸发器去除有机溶剂，旋转蒸发时间为1h，得到药脂薄膜；

(4)水化：加入4ml去离子水，将药脂薄膜洗脱下来，得到药脂混悬液；

(5)声振：将药脂混悬液预冷，然后缓慢加入120μl全氟正戊烷至药脂混悬液中，使用声振仪声振乳化，得到乳白色液体；

(6)离心：将乳白色液体高速离心，离心转速为8000rpm，温度为4℃，时间为5min，离心完毕去弃上清液，用去离子水重悬沉淀，如此重复两次，获得CPPs-10-HCPT-NPs混悬液；

(7)配置透明质酸溶液：将6mg透明质酸钠中加入10ml去离子水，溶解后配制成0.6mg/ml透明质酸溶液；

(8)静电吸附：将CPPs/10-HCPT-NPs混悬液与0.6mg/ml透明质酸溶液等体积混合，静置1h后，得到HA/CPPs-10-HCPT-NPs乳液。

2.根据权利要求1所述的HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒，其特征在于：所述的磷脂壳膜内部包裹有全氟戊烷。

3.根据权利要求2所述的HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒，其特征在于：其粒径为(284.2±13.3)nm，粒径多分散指数PDI为0.149。

4.根据权利要求3所述的HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒，其特征在于：其ZETA电位为-(16.55±1.50)mV。

5.根据权利要求4所述的HA介导CPPs修饰的载10-HCPT相变脂质纳米粒，其特征在于：其载抗肿瘤药物量为(5.23±0.34)，其全氟正戊烷包封率为(48.10±3.13)％。