[发明专利]一种从酵母菌发酵液中提取抗菌肽的方法

说明书

本发明公开了一种从酵母菌发酵液中提取抗菌肽的方法，其具体步骤为：将植物脱脂蛋白粉溶于水中，灭菌，冷却至室温，接种啤酒酵母，再加入阿拉伯糖，培养得酵母菌发酵液；向发酵液中加入壳寡糖，振荡吸附，离心，上清液浓缩，冷冻干燥即为多肽。上述壳寡糖为壳寡糖磁性粒子，其制备方法为：采用双酶解法联合过氧化氢法降解壳聚糖制备壳寡糖，向壳寡糖水溶液中加入Fe3O4磁粒子，超声处理，然后加入液体石蜡和吐温80，搅拌，再加入戊二醛交联，洗涤，干燥，即得壳寡糖磁性粒子。有益效果为：本发明抗菌肽的提取方法简单可行，分离效率高，提取效率、得率和纯度高，制得的抗菌肽的生物活性高、无苦味、颜色浅。

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，特别涉及一种从酵母菌发酵液中提取抗菌肽的方法。

背景技术

自从抗生素被发现后，由于它具有良好的抑菌效果被广泛地应用于医疗、传统兽药和饲料添加剂中，但是也由于抗生素的过度使用，致病菌的耐药性和药物残留等问题越来越严重，逐渐引起了人们的重视，寻找抗生素的有效替代品，解决耐药性及药物残留问题，迫在眉睫。而抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）是一种原核生物及真核生物均能产生的、分布广泛且种类繁多的、具有广谱抗菌活性的多肽类物质，它对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、原生动物、癌细胞、病毒等均有明显的抑制作用[25-27]，被视为具有极大应用前景的抗生素替代品，成为了国内外的研究热点。抗菌肽最早是瑞典科学家Boman等在一种名叫惜古比天蚕（Hyalophora cecropia）的昆虫体内诱导并分离纯化得到的，并将其命名为天蚕素（Cecropins）。到目前为止，人们纷纷从各种原核及真核生物当中鉴定出并分离得到1700多种抗菌肽类物质。

抗菌肽的种类繁多，分布也十分广泛，随着对抗菌肽的研究深入，抗菌肽的类别也越来越清晰。目前，抗菌肽一般根据以下几个方面进行分类：根据抗菌肽的合成途径将抗菌肽分为非核糖体合成抗菌肽（non-ribosomally synthesized peptides）和核糖体合成抗菌肽（ribosomally synthesized peptides）两类。根据抗菌肽的结构分为：（1）含α-螺旋的线性抗菌肽；（2）富含某些氨基酸残基的抗菌肽；（3）含1个二硫键的抗菌肽；（4）具有β-折叠结构的抗菌肽；（5）由已知多肽衍生的具有抗菌活性的肽[31]。根据抗菌肽的来源分为：（1）细菌抗菌肽，如多粘菌素、杆菌肽等；（2）昆虫抗菌肽，如天蚕素、昆虫防御素等；（3）植物源抗菌肽，如植物防御素、凤仙花素等；（4）蛙类动物抗菌肽，如蛙皮肽；（5）水生动物抗菌肽，包括鱼类、贝类、甲壳动物类抗菌肽，种类繁多复杂；（6）哺乳动物抗菌肽，主要有防御素（Defensins）、富组蛋白（Histatins）和Cathelicidins三种。由于天然抗菌肽的表达量低、提取过程复杂，导致难以大量获得，而化学合成的成本又高、价格昂贵，且对多数微生物宿主存在一定的毒性，这也导致抗菌肽的规模化的生产应用一直受到制约。所以，选用合适宿主，利用 基因工程手段进行抗菌肽的异源表达的研究一直备受关注。而酵母由于其背景清晰、蛋白翻译及后修饰功能完善以及便于培养等特点，使得其表达体系成为抗菌肽代谢工程研究中应用最为广泛和重要的表达体系之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取方法简单可行，分离效率高，提取效率、得率和纯度高，制得的抗菌肽的生物活性高、无苦味、颜色浅的从酵母菌发酵液中提取抗菌肽的方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

本发明所用微生物及其购买企业为：徐州赛傅生物科技有限公司。

一种从酵母菌发酵液中提取抗菌肽的方法，包括发酵、抗菌肽分离，其具体步骤为：