[发明专利]纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法

权利要求书

1.纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，包括：

步骤一、将纤维素酶产生菌的孢子置于湿室培养，直至孢子萌动至接近萌发的状态结束湿室培养；

步骤二、采用液滴微流控技术将所述步骤一培养的孢子、培养基以及纤维素酶标记底物包埋于液滴中，进行预培养，在孢子萌发产生的菌丝长度达到液滴边缘之前结束预培养；

步骤三、检测液滴内的荧光，根据液滴内的荧光强度进行液滴微流控分选，筛选出荧光强度相对较高的一个或几个液滴；

步骤四、对分选后的液滴中的孢子进行纯培养及复筛，以筛选出纤维素酶高产菌株。

2.如权利要求1所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述步骤二中，所述培养基由以下质量百分比的组分组成：微量元素0.1％，多聚蛋白胨0.1％，MgSO₄0.06％，乳糖0.1％-0.2％，pH 4.8-5.5；所述预培养的温度为30℃；所述预培养持续的时间为12h。

3.如权利要求2所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述培养基中乳糖的质量百分比为0.2％。

4.如权利要求1所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述湿室培养的持续时间为6-7h，所述湿室培养的温度为30℃。

5.如权利要求2所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述预培养的持续时间通过以下过程测定：

采用液滴微流控技术将所述步骤一培养的孢子和培养基包埋于液滴中，进行测定阶段的培养，观察孢子在液滴中的萌发情况，确定孢子萌发产生的菌丝长度达到液滴边缘的时间，所述预培养的持续时间短于所述孢子萌发产生的菌丝长度达到液滴边缘的时间。

6.如权利要求5所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述预培养的持续时间通过以下过程验证：

采用液滴微流控技术将所述步骤一培养的孢子、培养基以及纤维素酶标记底物包埋于液滴中，进行验证阶段的培养，按照所述预培养的持续时间，在所述验证阶段的培养结束之后，检测液滴的荧光，如液滴发出强烈的荧光，则证明孢子分泌的纤维素酶可以与纤维素酶标记底物发生反应发出荧光，所述预培养的持续时间可以用于分选。

7.如权利要求4所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述步骤一中，所述湿室培养的持续时间通过以下过程测定：

将孢子悬浮液滴于盖玻片上，进行湿室培养，每间隔一定时间取样检测孢子萌发率；每次统计至少300个孢子的萌发情况，直至孢子完全萌发为止；计算每个取样时间点的孢子萌发率，确定孢子萌动至接近萌发的时间，作为所述湿室培养的持续时间。

8.如权利要求1至4中任一项所述的纤维素酶高产菌株的高通量筛选方法，其特征在于，所述纤维素酶产生菌为里氏木霉。