[发明专利]一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法在审
| 申请号： | 201810131733.7 | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108456696A | 公开（公告）日： | 2018-08-28 |
| 发明（设计）人： | 刘骏;周春艳;金丽;肖倩;谢伟建;刘清波 | 申请（专利权）人： | 复百澳（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867 |
| 代理公司： | 苏州周智专利代理事务所(特殊普通合伙) 32312 | 代理人： | 周雅卿 |
| 地址： | 215024 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒包装 细胞 细胞株 构建 病毒 单克隆细胞株 基因敲除 克隆质粒 质粒转染 嘌呤霉素 基因 病毒量 靶向 质粒 转染 去除 生产成本 合成 筛选 生产 | ||
1.一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一：合成靶向EIF2AK2基因的sgRNA克隆质粒；
步骤二：EIF2AK2-sgRNA-Cas9质粒转染293T细胞；
步骤三：通过嘌呤霉素筛选获得EIF2AK2基因敲除的单克隆细胞株；
步骤四：病毒包装。
2.根据权利要求1所述的一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：用所述EIF2AK2基因设计用于Cas9作用的靶点序列为①TAATACATACCGTCAGAAGCAGG；②ATTCAGGACCTCCACATGATAGG；③AATACATACCGTCAGAAGCAGGG。
3.根据权利要求2所述的一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：根据靶点序列设计复合载体克隆位点需求的oligo，序列信息如下：①EIF2AK2-sgRNA-oligo-1F:CACCGTAATACATACCGTCAGAAGC；EIF2AK2-sgRNA-oligo-1R:AAACGCTTCTGACGGTATGTATTAC；
②EIF2AK2-sgRNA-oligo-2F:CACCGATTCAGGACCTCCACATGAT；
EIF2AK2-sgRNA-oligo-2R:AAACATCATGTGGAGGTCCTGAATC；
③EIF2AK2-sgRNA-oligo-3F:CACCGAATACATACCGTCAGAAGCA；
EIF2AK2-sgRNA-oligo-3R:AAACTGCTTCTGACGGTATGTATTC。
4.根据权利要求1所述的一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：所述步骤一中选用的基因敲除载体为lentiCRISPRv2载体。
5.根据权利要求1所述的一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：所述步骤四中选用Lenti-GFP慢病毒进行包装。
6.根据权利要求1所述的一种用于病毒包装的293T细胞株的构建方法，其特征在于：所述步骤三中嘌呤霉素的浓度为3ug/ml。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于复百澳（苏州）生物科技有限公司，未经复百澳（苏州）生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810131733.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
