[发明专利]坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法及其产品和应用在审
| 申请号： | 201810132812.X | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108484736A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 陈舜;姜博文;张伟;程安春;汪铭书 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C07K14/18 | 分类号： | C07K14/18;C12N15/70;C07K16/10;G01N33/569 |
| 代理公司： | 成都玖和知识产权代理事务所(普通合伙) 51238 | 代理人： | 胡琳梅 |
| 地址： | 611100 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒非结构蛋白 非结构蛋白 截短蛋白 截短 病毒 抗体灵敏度 表达条件 定位变化 多抗血清 免疫动物 免疫原性 体内表达 重要意义 重组表达 重组蛋白 表达量 检测 可用 效价 应用 蛋白 细胞 感染 优化 研究 | ||
1.坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)以感染坦布苏病毒的鸭胚成纤维细胞提取的RNA为模板，反转录合成cDNA，然后以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物进行PCR扩增，扩增获得NS2A截短基因；
2)将步骤1)扩增获得的NS2A截短基因连入表达载体获得重组表达载体，然后将重组表达载体转化宿主表达菌，获得工程菌，然后将工程菌用IPTG诱导表达，经纯化获得坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白。
2.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述表达载体为pGEX-4T-1质粒。
3.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述宿主表达菌为BL21(DE3)。
4.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：步骤2)中，所述诱导表达为将工程菌培养至A600＝0.6时，按终浓度为0.4～0.5mM加入IPTG，诱导表达6～8小时。
5.根据权利要求1所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白的表达方法，其特征在于：所述纯化为取诱导表达菌液，离心收集菌体，然后加入相当于菌液体积1/10的浓度为20mM、pH为8的Tris-HCl重悬菌体，取重悬菌液，加入相当于重悬菌液体积1/5的6×loadingbuffer，100℃水浴加热变性10分钟后用12％的SDS-PAGE凝胶电泳，电泳后用0.25mMol/L的KCL溶液显色，切胶回收目的片段，利用透析袋获得坦布苏病毒NS2A截短蛋白。
6.由权利要求1～5任一项所述的表达方法获得的坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白。
7.权利要求6所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白在制备抗坦布苏病毒非结构蛋白NS2A多克隆抗体中的应用。
8.利用权利要求6所述坦布苏病毒非结构蛋白NS2A截短蛋白制得的抗坦布苏病毒非结构蛋白NS2A多克隆抗体。
9.权利要求8所述抗坦布苏病毒非结构蛋白NS2A多克隆抗体在检测坦布苏病毒感染中的应用。
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