[发明专利]一种构建肾脏可诱导性固有巨噬细胞浸润小鼠模型的方法

权利要求书

1.一种构建肾脏可诱导性固有巨噬细胞浸润小鼠模型的方法，其特征在于，包括在诱导的条件下特异性地在小鼠肾小管细胞内表达IL34基因的步骤；

所述在诱导的条件下特异性地在小鼠肾小管细胞内表达IL34基因的步骤通过使全能细胞中同时具有IL34条件表达框和肾小管组织特异性启动子驱动的在诱导条件下有活性的Cre重组酶表达框来实现，所述IL34条件表达框从5’到3’依次包括靶基因表达启动子、两端带有方向相同的loxp序列的转录阻碍片段和IL34基因编码框；

所述肾小管组织特异性启动子为Cdh16基因启动子；

所述在诱导条件下有活性的Cre重组酶为他莫昔芬可诱导的Cre重组酶，所述在诱导条件下有活性的Cre重组酶表达框插入于小鼠Cdh16基因第18个外显子与3’UTR之间；

所述靶基因表达启动子为CAG启动子；

所述IL34条件表达框插入于Rosa26基因位点处；

所述方法包括以下步骤：

S1：构建带有所述IL34条件表达框的LSL-IL34小鼠；

S2：构建带有所述肾小管组织特异性启动子驱动的在诱导条件下有活性的Cre重组酶表达框的KSP-iCreERT2小鼠；

S3：将所述LSL-IL34小鼠与所述KSP-iCreERT2小鼠杂交，得到的子代小鼠即为肾脏诱导性固有巨噬细胞浸润小鼠模型；

步骤S1包括以下步骤：

S11：构建第一打靶载体，所述第一打靶载体除了包括所述IL34条件表达框外，还在两端设置有与Rosa26基因同源的片段；

S12：将步骤S11中构建的所述第一打靶载体转入小鼠受精卵中，通过CRISPR/Cas9系统插入到Rosa26基因位点处，得到LSL-IL34小鼠受精卵；

S13：将所述LSL-IL34小鼠受精卵培养成LSL-IL34小鼠；

步骤S2包括以下步骤：

S21：构建第二打靶载体，所述第二打靶载体带有在诱导条件下有活性的Cre重组酶编码框iCreERT2，以及连接在所述编码框iCreERT2的5’端的P2A序列，此外，所述第二打靶载体的两端还设置有小鼠Cdh16基因的同源片段使其能插入到小鼠Cdh16基因第18个外显子与3’UTR之间；

S22：将步骤S21中构建的所述第二打靶载体转入小鼠受精卵中，通过CRISPR/Cas9系统插入到Rosa26基因位点处，得到KSP-iCreERT2小鼠受精卵；

S23 ：将所述KSP-iCreERT2小鼠受精卵培养成KSP-iCreERT2小鼠。