[发明专利]柳杉二醇合成酶、其编码基因及在生物合成上的应用有效
| 申请号： | 201810134018.9 | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108330122B | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 高伟;黄璐琦;童宇茹;苏平;关红雨 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/81;C12N1/19;C12N5/10;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 陆军 |
| 地址： | 100069 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 合成酶 二醇 编码基因 生物合成 植物育种 聚合酶链式反应 合成生物学 酵母工程菌 雷公藤 基因 构建 酵母 克隆 应用 生产 | ||
1.一种柳杉二醇合成酶，所述合成酶如SEQ ID NO：2所示氨基酸序列。
2.编码权利要求1所述合成酶的基因，所述基因为如下中的至少一种：
(1)SEQ ID NO：1第所示的核苷酸分子；或
(2)SEQ ID NO：1第所示的核苷酸分子经取代一个或多个核苷酸且表达权利要求1所述合成酶的核苷酸序列。
3.重组表达载体，其包含启动子、权利要求2所示基因和转录终止子。
4.权利要求3所述的表达载体，其为将启动子、柳杉二醇合成酶编码基因、终止子与附加型载体采用酵母同源重组的方法拼接起来，所述附加型载体为酵母表达载体。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其中所述酵母表达载体选自pYX212、pYES2.0、pRS425、pRS426或p424。
6.根据权利要求3所述的表达载体，其中所述载体为以下中的任意一种：
(1)重组表达载体pYX212-TwCS：其包含启动子TPIp、柳杉二醇合成酶表达基因TwCS、终止子pYX12t；
(2)重组表达载体pYX212-ERG20+TwCS：其包含启动子TPIp、EGR20基因、酵母终止子FBA1t、酵母启动子TEF1p、柳杉二醇合成酶表达基因TwCS、终止子pYX12t；
(3)重组表达载体pYX212-IDI+TwCS：其包含启动子TPIp、IDI基因、酵母终止子FBA1t、酵母启动子TEF1p、柳杉二醇合成酶表达基因TwCS、终止子pYX12t；
(4)重组表达载体pYX212-(IDI-EGR20)+TwCS：其包含启动子TPIp、IDI基因、融合蛋白连接肽、EGR20基因、酵母终止子FBA1t、酵母启动子TEF1p、柳杉二醇合成酶表达基因TwCS、终止子pYX12t；
(5)重组表达载体pYX212-(EGR20-IDI)+TwCS：其包含启动子TPIp、EGR20基因、融合蛋白连接肽、IDI基因、酵母终止子FBA1t、酵母启动子TEF1p、柳杉二醇合成酶表达基因TwCS、终止子pYX12t；
其中所述融合蛋白为GGGS、GSG、GSGGGGS、GSGEAAAK、GSGEAAAKEAAAK或GSGMGSSSN中的任意一种。
7.根据权利要求6所述的表达载体，其中所述融合蛋白为GGGS，编码基因为ggtggtggttct。
8.一种生产柳杉二醇工程菌，其包含权利要求2所述基因或权利要求3-7中任意一权利要求所述重组表达载体。
9.根据权利要求8所述的工程菌，其中所述工程菌选自酵母细胞。
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