[发明专利]一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备及应用在审
| 申请号： | 201810135244.9 | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108359645A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 刘光清;缪秋红;朱杰;唐井玉;殷冬冬;李传峰;陈宗艳 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/35;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杆状病毒 衣壳蛋白 兔病毒性出血症病毒 兔病毒性出血症 制备 重组质粒 昆虫杆状病毒表达 病毒表达产物 转染昆虫细胞 感受态细胞 亚单位疫苗 脂质体介导 蛋白电泳 电镜观察 昆虫细胞 免疫印迹 质粒转化 构建 扩增 质粒 应用 克隆 成功 预防 研究 | ||
1.一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、扩增RHDV2的VP60基因；
B、将步骤A得到的VP60基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体中，得质粒；
C、将步骤B得到的质粒转化感受态细胞，得重组质粒；
D、将步骤C得到的重组质粒在脂质体介导下转染昆虫细胞，即得所述表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒。
2.根据权利要求1所述的表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备方法，其特征在于，步骤A中，扩增RHDV2的VP60基因采用的引物序列如SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示。
3.根据权利要求2所述的表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的制备方法，其特征在于，所述引物的酶切位点分别为GAATTC和TCTAGA。
4.一种根据权利要求1所述方法制备的表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒。
5.一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的表达产物鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒感染昆虫细胞后进行培养，取培养的病毒上清液，通过Western-blot以及IFA方法对病毒表达的特征蛋白进行鉴定。
6.根据权利要求5所述的表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的表达产物鉴定方法，其特征在于，所述表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒与昆虫细胞的比例为1:10～1:100。
7.根据权利要求5所述的表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的表达产物鉴定方法，其特征在于，所述培养条件为：28℃培养96h～120h。
8.一种表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒的应用，其特征在于，所述应用包括：采用所述表达兔病毒性出血症病毒Ⅱ型衣壳蛋白杆状病毒制备兔病毒性出血症Ⅱ型亚单位疫苗，或制备RHDVⅡ型酶联免疫吸附试剂中的应用。
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