[发明专利]联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及试剂盒

权利要求书

1.一种联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维棉和吸水纸，在所述硝酸纤维素膜上包被有CA19-9单克隆抗体作为检测1线（T1线）、CEA单克隆抗体作为检测2线（T2线）、以及羊抗鼠多克隆抗体作为质控线（C线），在所述玻璃纤维棉上分为点样区和结合区，在所述结合区上喷涂有时间分辨荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体复合物、CEA单克隆抗体复合物。

2.根据权利要求1所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，用于标记的CA19-9单克隆抗体亚型为IgG3，效价为1:256，标记量为10-100ug、优选40-80ug，更优选地，包被的CA19-9单克隆抗体亚型为IgG1，效价为1:128，包被量为0.5-2.5mg/mL、优选0.5-1.5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，用于标记的CEA单克隆抗体亚型为IgG3，效价为1:128，标记量为10-100ug、优选30-65ug，更优选地，包被的CEA单克隆抗体亚型为IgG2a，效价为1:256，包被量为0.5-2.5mg/mL、优选0.5-1.5mg/mL。

4.根据权利要求1所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球为羧基、氨基基团荧光微球，优选为镧系元素螯合物，其粒径为100-500nm、优选180-300nm。

5.根据权利要求1所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体和CEA单克隆抗体通过以下方法进行制备：将时间分辨荧光微球用缓冲液清洗后，加入碳二亚胺，恒温振荡活化，加入有机溶剂混匀后离心洗涤除去碳二亚胺，用缓冲液重悬微球，再分别加入用于标记的CA19-9单克隆抗体和CEA单克隆抗体，恒温振荡标记，离心后用复溶缓冲液重悬，加入封闭液封闭，得到时间分辨荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体复合物和CEA单克隆抗体复合物。

6.根据权利要求5所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述缓冲液选自于Tris-Hcl缓冲液、硼酸缓冲液、MES缓冲液或PB缓冲液，优选为pH7.5-8.5的0.02-0.1M硼酸缓冲液；所述有机溶剂为乙醇、异丙醇或丙酮等；所述复溶缓冲液成分包括Tris-Hcl、BSA、T-20、PVP、PEG20000、海藻糖、NaN₃；所述封闭液成分包括BSA。

7.权利要求1-6中任一项所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条的制备方法，所述方法包括如下步骤：

（1）分别制备时间分辨荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体复合物和CEA单克隆抗体复合物；

（2）检测线、质控线抗体的包被：将硝酸纤维素膜粘贴在底板的中间位置，并与上端的吸水纸重叠接触，将稀释的CA19-9单克隆抗体、CEA单克隆抗体及羊抗鼠多克隆抗体分别包被在硝酸纤维素膜上的T1线、T2线和C线位置，烘干；

（3）结合区喷涂：将玻璃纤维棉浸泡在处理液中，捞出后烘干，将步骤（1）制备的荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体复合物和CEA单克隆抗体复合物混合后，喷涂在烘干的玻璃纤维棉上的结合区内，烘干；

（4）组条：将步骤（3）喷涂后的玻璃纤维棉粘贴在PVC底板上，结合区一端压在所述硝酸纤维素膜上，重叠接触。

8.联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-6中任一项所述的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，或由权利要求7所述的制备方法获得的联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条。