[发明专利]联合检测CA19-9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条及试剂盒

说明书

本发明涉及一种联合检测CA19‑9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维棉和吸水纸，在所述硝酸纤维素膜上包被有CA19‑9单克隆抗体作为检测1线（T1线）、CEA单克隆抗体作为检测2线（T2线）、以及羊抗鼠多克隆抗体作为质控线（C线），在所述玻璃纤维棉上分为点样区和结合区，在所述结合区上喷涂有时间分辨荧光微球标记的CA19‑9单克隆抗体复合物、CEA单克隆抗体复合物。本发明针对CA19‑9与CEA联合检测的时间分辨荧光免疫层析试纸条及试剂盒，能够实现在较短时间内完成对CA19‑9与CEA的浓度检测，检测结果准确度高、灵敏性好，能够满足临床床旁快速检测和基层社区医院的需要。

技术领域

本发明属于诊断试剂盒技术领域，具体涉及一种联合检测肿瘤标志物糖链抗原19-9与癌胚抗原的时间分辨荧光免疫层析试纸条、包含所述试纸条的试剂盒，以及它们在胰腺癌诊断中的应用。

背景技术

糖链抗原19-9（Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）是一种由消化系统肿瘤组织所产生的特异性糖蛋白，也被称为唾液酸化的Lewis^a抗原。CA19-9属于消化系统相关抗原，主要表达于胰腺上皮细胞，正常人体血清中的含量小于37 U/ml。研究表明，CA19-9在消化系统恶性肿瘤患者体内有异常表达，其中，在胰腺癌、胆道癌、胃癌、结肠癌、食管癌、肝癌中存在较高的阳性率，而胰腺癌患者中CA19-9的阳性率最高，达到86-96%，并且在胰腺癌初期，血清中CA19-9的含量达到406 U/ml，CA19-9可作为胰腺癌重要的早期诊断指标之一。

癌胚抗原（CEA）是一种人胚胎原性酸性蛋白，在正常人的血液中含量小于3.4ng/mL，其含量的异常升高与肿瘤细胞的增殖密切相关。CEA是一种广谱性肿瘤标志物，在目前已经广泛应用于临床中肿瘤的检测诊断。

血清中CA19-9与CEA对于胰腺癌的诊断具有一定的价值，单独检测CA19-9与CEA时，对于胰腺癌的确诊率较低，而当两者联合检测时对于胰腺癌的诊断显著提高，几乎为100%。因此CA19-9与CEA联合检测胰腺癌时敏感性高、特异性强，检测方便，对于胰腺癌的早期诊断具有显著意义。

目前，国内针对CA19-9与CEA的检测方法有放射免疫测定法、化学发光法、电化学发光法、酶联免疫法等，然而，这些方法需要在实验室借助设备进行，均不适宜用于床旁快速诊断。荧光快速层析检测技术具有安全、费用低、操作简便、可实现床旁快速检测等优点，其中，时间分辨荧光免疫层析无放射性污染、无背景荧光干扰，其原理为：利用时间分辨荧光微球的荧光强度实现对待测物的定量分析。以硝酸纤维素膜为固相载体，待测液为流动相，在吸水纸的吸引下，流动相在硝酸纤维素膜的虹吸作用下与固定在硝酸纤维素膜上的抗体结合形成免疫复合物，形成检测线。待测物的含量与检测线的荧光强度呈现一定的关系，通过检测荧光信号，实现对待测物的定量检测。该方法作为POCT发展的新方向之一，成为目前的研究热点，在临床检测中具有广阔的发展前景。基于此，本发明研究开发出针对CA19-9与CEA联合检测的时间分辨荧光免疫层析试纸条及试剂盒，能够实现在较短时间内完成对CA19-9与CEA的浓度检测，检测结果准确度高、灵敏性好，能够满足临床床旁快速检测和基层社区医院的需要。

发明内容

为解决上述技术问题，发明人采用小鼠腹腔接种法制备获得CA19-9单克隆和CEA单克隆抗体，并采用时间分辨荧光层析方法对不同亚型和效价组合的抗体进行配对筛选，获得了线性范围宽，R²值最大的配对结果，同时，对荧光微球进行筛选，制备获得了质量稳定可控的时间分辨荧光微球标记的CA19-9单克隆抗体复合物、CEA单克隆抗体复合物，所制备的试纸条质量稳定，荧光强度高，检测性能好，为胰腺癌的临床诊断提供了有效工具。

具体而言，本发明提供了如下技术方案：