[发明专利]一种同时检测三种隐球菌的引物探针组合和荧光定量PCR试剂盒有效
申请号: | 201810137956.4 | 申请日: | 2018-02-10 |
公开(公告)号: | CN108060263B | 公开(公告)日: | 2020-03-06 |
发明(设计)人: | 方园;吕火烊;欧阳云 | 申请(专利权)人: | 杭州缔蓝生物技术有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 刘奇 |
地址: | 310000 浙江省杭州市滨*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 同时 检测 三种隐 球菌 引物 探针 组合 荧光 定量 pcr 试剂盒 | ||
1.一种基于荧光PCR法同时检测三种隐球菌的引物探针组合,所述隐球菌包括新生隐球菌、格特隐球菌和罗伦特隐球菌,其特征在于,所述引物包括上游引物和下游引物,所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示,所述探针为在SEQ ID NO.3所示序列的5′端修饰有荧光基团、3′端修饰有荧光猝灭基团的物质。
2.根据权利要求1所述的引物探针组合,其特征在于,所述荧光基团包括FAM、SYBRGreen I、JOE、VIC、NED、CY-3、TExAS Red或CY-5。
3.根据权利要求1所述的引物探针组合,其特征在于,所述荧光猝灭基团包括TAMRA或BHQ1。
4.一种同时检测三种隐球菌的检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:权利要求1~3任意一项所述引物探针组合、阴性对照、阳性对照和PCR反应液。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒,其特征在于,所述PCR反应液包括:dATP、dCTP、dGTP、dUTP、Taq DNA聚合酶、尿嘧啶-N-糖基化酶、参比荧光、MgC]2和缓冲液。
6.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述阴性对照为含无关基因的质粒,所述无关基因的序列如SEQ ID NO.4所示。
7.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照包括含新生隐球菌阳性对照DNA片段的质粒、含格特隐球菌阳性对照DNA片段的质粒和含罗伦特隐球菌阳性对照DNA片段的质粒,所述新生隐球菌阳性对照DNA片段、格特隐球菌阳性对照DNA片段和罗伦特隐球菌阳性对照DNA片段的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5~7所示。
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