[发明专利]一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法

权利要求书

1.一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、向壳聚糖溶液中添加Fe2+和Fe3+离子，搅拌混匀形成含有Fe2+和Fe3+离子的壳聚糖混合溶液；

b、将含有Fe2+和Fe3+离子的壳聚糖混合溶液逐滴滴入碱性浸泡液，交联后进行冷冻干燥，形成磁性壳聚糖小球；

c、将磁性壳聚糖小球投入加有反硝化细菌菌液的培养液中，连续培养，得到磁性壳聚糖载反硝化细菌小球。

2.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，壳聚糖溶液通过脱乙酰度≥90％的壳聚糖于体积分数为2％冰乙酸的酸性环境中搅拌溶解获得，Fe2+通过FeCl2·4H2O于水中溶解获得，Fe3+离子通过FeCl3·6H2O于水中溶解获得。

3.根据权利要求2所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：壳聚糖溶解于体积分数为2％冰乙酸的搅拌速度为600r/min，搅拌时长为30min，温度为室温。

4.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，添加Fe2+和Fe3+离子，Fe2+和Fe3+离子的摩尔比为1:2，搅拌速度为300r/min，温度为室温。

5.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，碱性浸泡液是由NaOH和柠檬酸钠配制而成。

6.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，将含有Fe2+和Fe3+离子的壳聚糖混合溶液逐滴滴入碱性浸泡液是指通过蠕动泵在1r/min的转速下将含有Fe2+和Fe3+离子的壳聚糖混合溶液滴入碱性浸泡液中。

7.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，交联采用的交联剂为柠檬酸钠，交联时长为10h，冷冻干燥时长为36h。

8.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，用去离子水多次冲洗磁性壳聚糖小球，洗净残留的碱和交联剂。

9.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤c中，将制备好的磁性壳聚糖小球投入加有30ml菌液的营养液中进行负载，OD600为0.1-0.3，OD600是用10mm比色皿在600nm波长下通过可见分光光度计测得的。

10.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖载反硝化细菌小球的制备方法，其特征在于：所述步骤c中，连续培养是指在水浴震荡箱内避光进行，震荡速度为160r/min，负载温度为25-35℃，培养液的pH为7-9，培养液中硝酸盐氮浓度为25-75mg/l，连续培养时长为120h。