[发明专利]一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法

权利要求书

1.一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）材料选取与消毒：采摘当年80-90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5-1h，双蒸水冲荡2-3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理10-13min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3-4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；

2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后5-8d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1000～1500lx，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，培养时间15-20d，得到诱导芽植株；

3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.0-1.5cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500～2000lx，增殖培养时间20-30d，得到增殖培养的幼苗；

4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶2-3片，株高3-4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，诱导生根时间15-20d，得到诱导生根的幼苗；

5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6cm，根3-5条，叶5片，叶长2-3cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5-7天后，打开瓶盖炼苗1-2天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15-30℃，湿度应保持在75％-85％，避免阳光直射；2-3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗；

所述芽诱导培养基为N₆+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L^-1活性炭； pH值为5.8；

所述增殖培养基为N₆+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L^-1活性炭； pH值为5.8；

所述生根培养基为1/2N₆+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L^-1活性炭； pH值为5.8。