[发明专利]一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法

权利要求书

1.一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

1）材料选取与消毒：采摘当年80-90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5～1h，双蒸水冲荡2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理8～10min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3～4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后即可进行接种；

2）原球茎诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的原球茎诱导培养基中；培养条件：培养温度为23±2℃，无光培养79d后，第80d光照时间设置3h，光照强度500～1000lx,之后10d光照时间5h，光照强度500～1000lx，培养时间90d，得到生长原球茎；

3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到原球茎切成2-3cm方块，分别接种于芽增殖培养基中，光照时间8h/d，光照强度100～1500lx，增殖培养时间20-30d，得到增殖培养幼苗；

4）诱导生根：将步骤3）诱导培养带有叶2～3片、株高3～4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20-25d；

5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时完成寄树兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1-2d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草：碎树皮:碎石子质量比例为1:2:2:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15～30℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射；2-3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗；

所述原球茎诱导培养基为MS+0.5mg/LKT+0.5mg/LNAA+2g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0 g/L活性炭；pH值为5.4-5.7；

所述增殖培养基 为MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+0.01mg/LTDZ+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0g/L活性炭，pH值为5.4-5.7；

所述生根培养基为1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.1mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.5g·L^-1活性炭；pH值为5.4-5.7。