[发明专利]重组口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种重组口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和应用。具体地，本发明以口蹄疫病毒结构蛋白构成的不含病毒核酸的病毒样颗粒，该病毒样颗粒免疫动物，能激起机体产生针对口蹄疫的免疫保护，且不具有传染性，相比传统灭活病毒疫苗有着更高的安全性。本发明还提供了上述重组口蹄疫病毒样颗粒的制备方法。

技术领域

本发明涉及基因工程和免疫领域，更具体地涉及一种重组口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，该病毒传染性高且传播迅速。主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其他动物。其临诊特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。口蹄疫在世界范围内多有爆发，有强烈的传染性,一旦发病传播速度快,往往造成大流行,不易控制和消灭,带来严重的经济损失，被国际兽疫局(OIE)列为A类动物疫病名单之首,是世界各国检疫和防疫的重点对象。我国也将其列为第一类动物传染病的第一位。口蹄疫流行情况从过去的点发到现今的普发，从有季节性到无季节性。

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员，该病毒宿主范围广，遗传变异率高，抗原差异大，现存在七种血清型，0、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1，每种又有众多个不同的亚型，血清型间无交叉免疫现象。即使是免疫动物在接触新病毒后，也可形成隐性感染而持续带毒，在免疫和非免疫条件下病毒均可适应机体而长期存在。其中O型血清型最为常见，A型口蹄疫目前在我国只是零星散发。成年动物感染口蹄疫后大部分能康复，但有时幼畜病死率可达100％，能够造成感染动物相关的生产力下降，成为制约国际、国内动物和动物产品贸易的主要障碍。

疫苗免疫是控制和预防口蹄疫流行的有效技术方法。目前市场上主要采用的疫苗是病毒灭活疫苗，该类口蹄疫疫苗存在以下缺点：(1)稳定性差，保护期短，防疫效果不理想；(2)制备过程中存在散毒的安全隐患，需要P3级安全防护，成本高、操作难；(3)制备过程中，非结构蛋白去除不彻底，会造成区分自然感染及免疫动物的困难；(4)灭活不彻底将存在安全性问题。

因此，本领域迫切需要开发安全、高效、经济的新型口蹄疫疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型重组口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和应用。

具体地，本发明的目的在于提供一种新型口蹄疫病毒样颗粒的基因序列及蛋白序列，并提供了该病毒样颗粒的制备方法，该病毒样颗粒应用于提高免疫动物对口蹄疫病毒的免疫保护力，降低动物口蹄疫的发病率。

在本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，所述的融合蛋白从N端至C端具有式I结构：

P1－2A－3C (I)

式中，

P1为口蹄疫病毒外壳结构蛋白VP元件，

2A为非结构蛋白2A蛋白酶，

3C为非结构蛋白3C蛋白酶，其中，所述P1-2A元件可在酶3C的酶切作用下，形成VP0蛋白、VP3蛋白和VP1蛋白。

在另一优选例中，所述的融合蛋白可自剪切并释放出3C蛋白酶。

在另一优选例中，所述的酶3C是源自所述融合蛋白的3C蛋白酶。

在另一优选例中，所述的VP0蛋白、VP3蛋白和VP1蛋白可以自我组装成与天然口蹄疫病毒非常相似的VLP。

在另一优选例中，所述非常相似是指所述VLP与天然口蹄疫病毒的相似度≥80％，较佳地，≥90％。