[发明专利]人泌乳素检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种人泌乳素PRL均相检测试剂盒的制备方法，包括：制备包含受体及与之结合的第一结合单元的组分，受体能与单线态氧反应生成可检测信号，第一结合单元能结合PRL的第一表位；制备包含第一标记物及与之结合的第二结合单元第二组分，第二结合单元能结合PRL的第二表位，第二表位与第一表位是PRL的不同结合特性的表位或不同位置的相同结合特性的表位；制备包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物的第三组分，供体能够在激发状态产生单线态氧。经该方法制备的试剂盒能够高效检测PRL。

技术领域

本发明属于生物分子检测技术领域，涉及一种无基质效应的均相免疫检测试剂盒，具体涉及一种用于检测人泌乳素的均相免疫检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

泌乳素又称催乳素(Prolactin，PRL)，由垂体前叶细胞分泌，是维持乳房正常发育和妇女哺乳期的必需条件。PRL分子量约22500Da，是一种由198个含3个链间二硫键的氨基酸组成的单链多肽。泌乳素的分泌主要由丘脑下部释放的催乳素抑制因子(多巴胺)和催乳素释放因子(五羟色胺)来控制。下丘脑促甲状腺激素释放激素(TRH)也会刺激PRL分泌，此作用可用于检测PRL存量和垂体引起的PRL不正常分泌的激发试验。泌乳素广泛参与生殖、妊娠哺乳、生长发育、物质代谢、应激反应、免疫调节等。在人类主要是促进乳腺分泌组织的发育和生长，启动和维持泌乳、使乳腺细胞合成蛋白增多。

目前，血清PRL定量分析的主流方法是化学发光免疫分析，包括酶促化学发光(贝克曼公司产品)、吖啶酯化学发光(西门子公司产品)和电化学发光(罗氏公司产品)。酶促化学发光采用酶作为标记物，配合使用发光底物；吖啶酯为直接化学发光，在双氧水和碱性条件下诱导发光；电化学发光采用三联吡啶钌作为标记物，配合使用三丙胺和电极诱导发光。以上三种主流发光免疫分析方法，虽然所用标记物不同，但是具备共同特点即均属于非均相免疫分析(Heterogeneous immunoassay)。非均相免疫分析是指抗体-抗原反应后、检测信号前，需要分离去除未参加反应的、游离状态的标记抗体。分离结合标记物和游离标记物常用的方法是固相吸附分离技术。针对PRL定量分析而言，将捕获抗体与固相载体连接，待检抗原分别与标记抗体和捕获抗体结合，于固相材料表面形成双抗体夹心复合物(结合标记物位于固相表面)，而过量的、未参与抗原抗体反应的游离标记抗体分布于液相中。去除液相溶液、并反复洗涤固相(微粒)，可有效去除游离状态标记抗体。

固相吸附分离方法有两个重要环节：包被和洗涤。此种非均相反应模式因包被和洗涤环节的存在，给标记免疫分析造成很大缺陷，主要表现在以下两个方面：

1.在包被过程，无论物理吸附还是化学连接，包被于固相材料表面的抗体分子其构象不同于处于液相中的抗体分子，与抗原分子结合能力因空间位阻效应将受到一定限制；无论采用微球还是微孔板作为固相材料，由于包被面积有限，捕获抗体分子不能最大限度满足大量待测抗原的需要，由此将影响检测范围。

2.“洗板”或“洗球”是非均相免疫分析中的重要环节且多次出现。洗涤过程增加检测程序的复杂性，增加检测时间并给实现自动化带来障碍。此外，由于洗涤过程特别是酶免疫分析，难于实现标准化，每个测试孔之间洗涤效果不同，在一定程度上影响检测的精密度，出现批间、批内差异。

固相吸附分离方法由于每次洗涤过程需要消耗时间，也必然由于洗涤分离所带来“误差”。洗涤误差是非均相免疫分析误差的重要来源，影响分析方法的精密度，从而影响分析方法的准确度和分析敏感度。

出于这种考虑，本发明的发明人进行了研究，期望提供一种具有较高的精密度、准确度和灵敏度，操作方法简便，且能够定量检测血清泌乳素PRL水平的检测试剂盒以及制备方法与检测方法。

发明内容