[发明专利]用于香榧苗期性别鉴定的特异性分子标记TGMI001

说明书

本发明公开了用于香榧苗期性别鉴定的特异性分子标记TGMI001。本分子标记TGMI001的上游引物TGMI001‑F核苷酸序列如SEQ.ID No1所示，下游引物TGMI001‑R核苷酸序列如SEQ.ID No2所示；所述标记在雄性个体中扩增所得特异性条带核苷酸序列如SEQ.ID No3所示。本特异性分子标记TGMI001可用于香榧苗期雌雄性别的早期鉴定检测，不但可以打击香榧幼苗掺假行为，减少损失，而且有助于造林时开展雌雄幼苗合理规划，避免大量雄株在生产中造成浪费；此外本特异性分子标记可用于雌雄性别标记辅助选择，提高育种效率，缩短育种周期，具有很大的应用潜力和较好的经济价值。

技术领域

本发明属于经济林木分子鉴定技术领域，具体涉及到一种用于香榧苗期性别鉴定的特异性分子标记TGMI001。

背景技术

香榧(Torreya grandis Fort.ex Lindl.cv.Merrillii Hu)是我国特有珍稀干果,是榧树中唯一进行人工规模化栽培的优良变异类型，也是集材用、药用、果用、油用和观赏于一体的经济树种，据记载已有1300多年的栽培历史。香榧经济价值高，全国对香榧苗木的需求量大，播种育苗是香榧育苗的主要手段之一。但作为多年生雌雄异株树种，香榧生长缓慢，童期长，实生苗繁殖一般需要15～20年才能开花结实，未开花的幼树难以鉴别雌雄。生产上结合香榧风媒传粉的特点，多采用嫁接的方法来提早结实和提高产量。但接穗来自成年雌株，一方面采集接穗会影响母株产量，另一方面接穗价格高、且常有掺假现象。因此，开展香榧苗期的性别鉴定，首先可以防止和杜绝以雄株冒充雌株的现象，减少损失；其次，在香榧雌株优树实生苗繁育的过程中可以提高育种效率；第三，通过香榧生产林中合理的性别布植，可以使亩产最大化。截止本发明，虽然有从形态标记、生理生化、细胞染色体和AFLP标记等多方面关于香榧性别的早期鉴定的研究报道，但均未找到一种准确高效的方法。

发明内容

本发明的一个目的是为了改善上述问题，提供一种用于香榧苗期性别鉴定的特异性分子标记TGMI001。

本发明开发了一种鉴别香榧苗期性别的特异性分子标记引物，其特征在于该引物核苷酸序列如下：

上游引物TGMI001-F：5’-GCCCAGGCATTCTGAAACA-3’，如SEQ.ID No1所示；

下游引物TGMI001-R：5’-CCCCGTCCCAAAAAACAAA-3’，如SEQ.ID No2所示。

此对特异性分子标记引物是采用普通PCR技术，利用目标起始密码子多态性(Start condon targeted polymorphism，SCoT)标记通用引物对香榧雌株和雄株样品DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳，筛选雌雄单株特异性条带进行测序，然后对测序获得的香榧雌雄差异条带序列进行比对，并以此设计特异性引物(TGMI001-F/R)。该引物对具有极高的专一性，用此对引物对香榧雌雄单株进行PCR扩增，只有雄株能获得461bp的DNA条带，而雌株没有；其雄株扩增得到的特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No3所示。

本发明的另一个目的是提供利用上述特异性分子标记引物对不同香榧幼苗进行雌雄快速鉴定的方法。

本发明采用上述特异性分子标记引物(TGMI001-F/R)作为特异性扩增引物，以待测香榧样本基因组DNA为模板，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现一条461bp的DNA条带，则待测样本为雄性个体；若电泳结果未出现一条461bp的DNA条带，则待测样本为雌性个体。

上述方法中扩增引物的选择、基因组DNA的提取确定，以及电泳检测，这些步骤均可按照本领域常规方法进行。

需要说明的是，本发明特异性性分子标记引物和检测方法仅适用于香榧雌雄个体的鉴别，即待测样本是限定为香榧样本的范围内，本领域普通技术人员采用本发明方法可对香榧个体进行雌性性别的快速鉴定，方法简便、准确、快速，是其他现有鉴别方法不能实现的。