[发明专利]一种外源基因转入桉树进行瞬时表达的方法在审
| 申请号： | 201810146283.9 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN108410904A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 钟子倩;黄真池;李柳如;黄俊文 | 申请（专利权）人： | 岭南师范学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 刘瑶云;陈伟斌 |
| 地址： | 524048 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 桉树 叶盘 瞬时表达 农杆菌侵染 种外源基因 暗处放置 快速检测 转录活性 农杆菌 启动子 培养液 转化 取出 重组农杆菌菌液 信号转导途径 转入 表达变化 表皮细胞 成熟叶片 基因表达 目的基因 外源基因 无菌滤纸 无菌载体 信号转导 转基因苗 抽真空 桉树叶 取样 浸泡 避开 损伤 消毒 改良 基因 进程 研究 | ||
1.一种外源基因转入桉树进行瞬时表达的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1. 取刚好完全展开的桉树成熟叶片，消毒，损伤其表层表皮细胞，并取样得到叶盘；
S2. 得到的叶盘置于外源基因重组农杆菌菌液中浸泡，抽真空；
S3. 取出农杆菌侵染后的叶盘置于吸满MS液体培养基的无菌载体上，暗处放置培养至待农杆菌完成转化。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述桉树为尾叶桉。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述农杆菌为农杆菌GV3101。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述农杆菌菌液OD600为0.6~1.0。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，叶盘直径为0.8～1.2cm。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述桉树成熟叶片为1年龄尾叶桉树苗枝条第三节间刚好完全展开的成熟叶片。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中，抽真空的时间为10～20min；抽真空的压强为-0.1～-0.2兆帕。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中，暗处放置培养10～12h。
9.权利要求1所述方法在进行启动子活性分析、基因功能分析或生产重组蛋白方面中的应用。
10.一种利用权利要求1所述方法的启动子活性分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1. 将待检测的启动子连接于表达载体中报告基因上游；
S2. 按照权利要求1所述的方法进行瞬时表达；
S3. 用诱导因子处理农杆菌完成转化的叶盘；
S4. 检测报告基因的活性。
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