[发明专利]一种高产两性霉素B的重组结节链霉菌及其应用

权利要求书

1.一种高产两性霉素B的重组结节链霉菌，其特征在于所述重组结节链霉菌是将外源基因导入结节链霉菌（Streptomyces nodosus）CCTCC NO：M 2017426获得的；所述外源基因包括透明颤菌血红蛋白基因Vhb、S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因MetK、两性霉素转录调控因子基因AmphRIV、全局调控因子基因AraC和红霉素强启动子ermE*p。

2.如权利要求1所述高产两性霉素B的重组结节链霉菌，其特征在于所述外源基因由透明颤菌血红蛋白基因Vhb、S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因MetK、两性霉素转录调控因子基因AmphRIV、全局调控因子基因AraC、红霉素强启动子ermE*p组成。

3.如权利要求1所述高产两性霉素B的重组结节链霉菌，其特征在于所述透明颤菌血红蛋白基因Vhb核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因MetK核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示，两性霉素转录调控因子基因AmphRIV核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示，全局调控因子基因AraC核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示，所述红霉素强启动子ermE*p核苷酸序列为SEQ ID NO.7所示。

4.如权利要求1所述的高产两性霉素B的重组结节链霉菌，其特征在于所述外源基因由透明颤菌血红蛋白基因Vhb、S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因MetK、两性霉素转录调控因子基因AmphRIV、全局调控因子基因AraC、红霉素强启动子ermE*p、ABC转运蛋白基因AmphH、ABC转运蛋白基因AmphG组成。

5.权利要求1所述高产两性霉素B的重组结节链霉菌在微生物发酵制备两性霉素B中的应用。

6. 如权利要求5所述的应用，其特征在于所述应用方法为：将重组结节链霉菌接种至发酵培养基，28 ℃、220 rpm发酵培养完全，获得含两性霉素B的发酵液，将发酵液分离纯化，获得两性霉素B；所述发酵培养基组成：葡萄糖70 g/L，牛肉膏8 g/L，大豆蛋白粉8 g/L，棉子粉10 g/L，CaCO₃ 10 g/L，KH₂PO₄ 0.2 g/L，溶剂为自来水，pH 7.0。

7. 如权利要求6所述的应用，其特征在于所述重组结节链霉菌发酵前，先进行种子扩大培养，再将种子液以体积浓度2%的接种量接种至发酵培养基，所述种子扩大培养方法为：将重组结节链霉菌接种至种子培养基中，28 ℃、220 rpm 培养46 h，获得种子液；所述种子培养基组成：蛋白胨20 g/L，NaCl 8 g/L，葡萄糖15 g/L，酵母粉10 g/L，CaCO₃ 1 g/L，溶剂为自来水，pH 7.0。