[发明专利]一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：具体组分如下：RT-PCR Buffer、黄热病毒/内参引物探针混合液A、基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B、酶系C、阳性对照、阴性对照。

2.根据权利要求1所述的一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：具体组分如下：RT-PCR Buffer 384μl、黄热病毒/内参引物探针混合液A48μl、基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B 48μl、酶系C 96μl、阳性对照400μl、阴性对照400μl。

3.根据权利要求1所述的一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的RT-PCR Buffer的组分为50mM tris-HCL、75mM Kcl、3mM Mgcl2、10mM DTT，所述的黄热病毒/内参引物探针混合液A的组分为黄热病毒和内参基因引物、探针，所述的基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B的组分为基孔肯雅病毒和内参基因引物、探针，所述的酶系C的组分为0.1U/μl Hitaq热启动DNA聚合酶、2.4U/μl super M-MLV反转录酶、0.32U/μl RRI，所述的阳性对照采用含有黄热病毒和基孔肯雅病毒目的基因片段的质粒菌，所述的阴性对照采用DEPC-H2O。

4.一种如权利要求1-3任一所述的黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒检测黄热病毒、基孔肯雅病毒的引物探针序列，其特征在于：具体信息如下：

5.根据权利要求4所述的一种检测黄热病毒、基孔肯雅病毒的引物探针序列，其特征在于：所述的黄热病毒、基孔肯雅病毒探针5’端FAM、JOE、FITC荧光素，3’端标记BHQ1、TAMRA或BHQ2猝灭荧光素，内参基因5’端HEX、ROX或CY5标记荧光素，3’端标记BHQ1、TAMRA或BHQ2猝灭荧光素。

6.一种采用如权利要求1-3任一所述的黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒检测黄热病毒、基孔肯雅病毒的荧光PCR反应体系，其特征在于：具体如下：

7.一种利用如权利要求1-3任一所述的黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒对黄热病毒、基孔肯雅病毒快速PCR检测，其特征在于：所述的检测方法包含以下步骤：

(1)、进行样本RNA的提取

用QIAGEN公司的QIAampMinElute Virus Spin Kit(货号：57704)或天根生化科技有限公司病毒RNA提取试剂盒(货号：DP315)或安徽安龙基因科技有限公司的病毒RNA提取试剂盒(货号：AL-L0107)，对样本RNA进行提取；

(2)、PCR反应体系的配制

在试剂配制室对PCR反应体系进行配制，PCR反应缓冲液16μl，酶系C 2μl、引物探针混合液2μl，将PCR反应液按20μl/管分装至PCR反应管中，将装有PCR反应液的反应管移至样本处理区；

(3)、加样

用带滤芯的吸嘴分别取已处理好的样本、阴性对照、阳性对照上清各5μl分别加到装有反应体系的PCR反应管中，盖上管盖，离心数秒后移至扩增检测区。

(4)、扩增

将PCR反应管放入荧光PCR扩增仪中进行扩增检测。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述的步骤(4)中，循环参数设定如下：(AB：ABI 7500FAST，Anlong：Pro Eco48，SLAN-96)：