[发明专利]一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，具体组分如下：RT‑PCR Buffer、黄热病毒/内参引物探针混合液A、基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B、酶系C、阳性对照、阴性对照。本发明具有检测速度快、灵敏度较高等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域领域，具体来说是一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

黄热病毒（yellow fever virus，YFV）属于黄病毒科，黄病毒属，病毒基因组为不分节段的单股正链RNA，只有一个血清型。黄热病（yellow fever，YF）是由黄热病毒引起的急性传染病，蚊是主要传播媒介。黄热病分城市型和丛林型两种，在非洲和南美洲热带地区流行，是国际卫生条例规定监控的3种传染病之一。WHO估计全球每年YF发病20万例，约3万例死亡。其中90%发生在非洲。2016年3月10日北京发现了我国首例输入性黄热病病例。但是从未有本地黄热病例的报道，但随着我国与非洲、南美洲等黄热病流行区的直航航线的不断开通，黄热病通过直航航班或经其他地区中转入境的可能性大大增大，所以，黄热病毒的检疫需要快速敏感的检测手段。

基孔肯雅病毒（chikungunya fever virus，CHIKV）属披膜病毒科甲病毒属，1997年被正式命名，为单股正链RNA病毒，其基因组RNA总长11805个核苷酸。基孔肯雅病毒（chikungunya fever，CHIK）是由基孔肯雅病毒经伊蚊叮咬传播的一种人、畜共患急性传染病，主要流行于非洲和亚洲热带国家与地区。人对CHIKV普遍易感，潜伏期通常2-12d，平均3-7d；主要临床特征为发热、皮疹、恶心、呕吐和严重关节痛等症状。2008年3月。广东检验检疫局卫生检验实验室从赴斯里兰卡务工回国的劳务人员血清样本中检测出CHIKV，是我国首例CHIK输入性病例。由于目前CHIK无疫苗预防和特效药治疗，及时开展疑似CHIK病例实验室诊断检测，防止其暴发与流行有重要意义。

目前，国内外黄热病毒（yellow fever virus，YFV）和基孔肯雅病毒（chikungunyafever virus，CHIKV）的诊断方法，主要还是依靠血清学实验、组织培养和常规的PCR检测，实时荧光定量PCR等方法。其中，血清学实验、组织培养，具有灵敏度低、免疫交叉反应以及周期长等缺点。常规的PCR也存在容易污染的不足，需要进行有效的改进。多重实时荧光PCR技术是将PCR技术和多色荧光标记探针相结合的先进技术，该方法具有快速、特异、灵敏、自动化程度高等特点，结合防污染技术处理，特别符合大规模、快速诊断需求。

本发明在实时荧光定量PCR的基础上对引物、探针和扩增体系进行优化，可在ABI7500荧光PCR仪器上实现一步RT-PCR检测仅需45min，在快速PCR仪器上30min内实现一步RT-PCR扩增检测。通过本发明大大的缩短了检测时间，可提高出入境口岸一线检验检疫人员的检测效率，既可以减少工作量又可以快速得出检测，对保护我国卫境安全和防止病例扩散具有重要意义。

目前，市场上的试剂盒普遍存在检测灵敏度低、检测速度较慢的缺陷，需要进行有效的改进。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中的检测灵敏度差、速度较慢的缺陷，提供一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒来解决上述问题。

为了实现上述目的，发明的技术方案如下：本发明公开了一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，具体组分如下：RT-PCR Buffer、黄热病毒/内参引物探针混合液A、基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B、酶系C、阳性对照、阴性对照。

作为优选，本发明公开了一种黄热病毒、基孔肯雅病毒快速荧光PCR检测试剂盒，具体组分如下：RT-PCR Buffer 384μl、黄热病毒/内参引物探针混合液A 48μl、基孔肯雅病毒/内参引物探针混合液B 48μl、酶系C 96μl、阳性对照400μl