[发明专利]一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法

权利要求书

1.一种非洲鸵鸟源性成分定量检测的双重数字PCR方法，其特征在于：采用双通道检测法，利用数字PCR系统同时探测非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因两种荧光信号，将非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列检测的探针分别标记为FAM和VIC，通过在同一PCR反应体系中测得的非洲鸵鸟特异性物种基因和高等动物特异性基因序列的拷贝数，计算得到非洲鸵鸟源性成分占高等动物源性成分的相对含量；

所述方法包括以下步骤：

（1）提取含有非洲鸵鸟源性成分的肉制品的动物组织基因组DNA；

（2）配制数字PCR反应体系；

（3）进行数字PCR反应；

（4）读取和分析数字PCR反应结果；

（5）计算所述非洲鸵鸟源性成分占总肉成分的相对含量，

非洲鸵鸟源性成分占总肉成分的相对含量X =，

其中A为非洲鸵鸟特异性基因拷贝数浓度，B为高等动物特异性基因拷贝数浓度；

所述非洲鸵鸟特异性基因的引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO. 3所示，所述高等动物特异性基因的引物和探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO. 5、SEQ ID NO. 6所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，采用试剂盒法提取所述肉制品的动物组织基因组DNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述数字PCR反应为微滴数字PCR反应和芯片数字PCR反应中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，当数字PCR反应为微滴数字PCR反应时，所述微滴数字PCR反应体系为20μL，各组分如下：2×ddPCR预混液 10 μL；浓度为10 μmol/μL的引物各0.8 μL，浓度为10 μmol/μL的探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，补水至20 μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所述微滴数字PCR反应条件为：95℃，5min，1℃/s；94℃，15 s，1℃/s，60℃，1 min，1℃/s，共49个循环；98℃，10 min，1℃/s；12℃保存反应产物。